【摘 要】
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目的 探讨内皮素受体B(EDNRB)基因启动子上游CpG岛甲基化在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)发病机制中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测2007年9月至2009
【机 构】
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华中科技大学同济医学院附属协和医院胃肠外科,武汉,430022;华中科技大学同济医学院附属协和医院腹腔镜外科,武汉,430022
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目的 探讨内皮素受体B(EDNRB)基因启动子上游CpG岛甲基化在先天性巨结肠(Hirschsprung disease,HD)发病机制中的作用.方法 采用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测2007年9月至2009年3月收集的经病检等证实的25例HD患儿病变组织标本EDNRB基因CpG岛甲基化状态, 以同期收集的16例非HD患儿正常结肠组织标本作为阴性对照, 采用荧光定量PCR(SYBR-Green 法)和Western-blot技术检测这25例HD患儿病变组织标本中EDNRB基因mRNA和蛋白的相对表达量.结果 25例标本MSP检测, 有2例发现甲基化, 甲基化率为2/25(8%); 16例阴性对照均未发现甲基化.荧光定量PCR发现: 甲基化组织EDNRB基因Ct值(扩张段0.13±0.08, 移行段0.10±0.06, 挛缩段0.09±0.05)均较非甲基化组织(扩张段0.59±0.24, 移行段0.57±0.32, 挛缩段0.48±0.30)有明显下调,差异具有统计学意义(P＜0.05).Western-blot发现:甲基化组织EDNRB基因蛋白相对灰度值(扩张段1.56±0.43, 移行段1.32±0.32, 挛缩段1.27±0.21)较非甲基化组织(扩张段1.72±0.36, 移行段1.52±0.62, 挛缩段1.48±0.49)有所下降,但差异无统计学意义(P＞0.05).结论 内皮素受体B(EDNRB)基因启动子上游CpG岛甲基化可能通过影响其mRNA的表达水平导致其表观遗传学的改变,进而导致HD的发生.
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