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目的
建立肝癌肿瘤相关成纤维细胞（CAF）分离、培养体系，并予以鉴定，同时进一步探讨CAF对肝癌细胞生物学功能的影响。
方法肝细胞癌（HCC）术后患者的肿瘤组织通过胶原酶消化、离心、重悬等技术手段，分离、纯化CAF。分别通过形态学观察及免疫荧光技术对CAF进行鉴定。在此基础上将分离鉴定的CAF与肝癌细胞株Huh7、HepG2进行共培养，建立CAF与肝癌细胞株体外共培养系统，同时利用CCK-8实验观察CAF对Huh7、HepG2细胞增殖的影响；利用Transwell实验分析CAF对Huh7、HepG2细胞侵袭能力的影响。
结果分离、培养成功的CAF形态学表现为长梭状或纺锤状，细胞体积与细胞核较其他细胞明显偏大。免疫荧光结果显示CAF特殊标志物α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和纤维连接蛋白均呈强阳性，并主要表现为胞膜染色。而肝癌细胞表面的特殊标志物甲胎蛋白（AFP）及血管内皮细胞表面特殊标志物CD31均阴性。Huh7、HepG2的增殖和侵袭能力明显增强。其中CAF与Huh7和HepG2细胞共培养24 h后，空白组与实验组中的细胞增殖率分别为（63±4）%、（78±5）%和（69±5）%、（81±3）%，差异均有统计学意义（均P<0.05）。CAF增强Huh7和HepG2穿膜能力，空白组与实验组中的穿膜细胞数目分别为（59.4±3.1）、（162.9±3.9）个和（104.8±2.6）、（166.4±4.2）个，差异均有统计学意义（均P<0.05）。
结论HCC患者肿瘤组织中分离、培养的细胞为CAF。CAF形态结构及蛋白表达等具有特异性，并促进肝癌细胞的增殖和侵袭。