【摘 要】
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)通过微小RNA-21(miR-21)靶向调控PTEN抑制缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞(H9c2细胞),建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,利用慢病毒表达系统,在H9c2心肌细胞内过表达或干扰微小RNA-21(miR-21 mimic or miR-21 inhibitor),将细胞分为6个组:正常对照组、模型对照组(H/R)、H/R+miR-21 mimic组、H/R+miR-21 inhibitor组、H/R+miR-21 mimic+AS
【机 构】
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广西中医药大学第一附属医院医学分子生物学实验室,南宁 530023;广西中医药大学第一附属医院药物临床试验机构办公室,南宁 530023
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目的 探讨黄芪甲苷(AS-Ⅳ)通过微小RNA-21(miR-21)靶向调控PTEN抑制缺氧/复氧(H/R)心肌细胞损伤的机制.方法 体外培养大鼠心肌细胞(H9c2细胞),建立心肌细胞缺氧/复氧损伤模型,利用慢病毒表达系统,在H9c2心肌细胞内过表达或干扰微小RNA-21(miR-21 mimic or miR-21 inhibitor),将细胞分为6个组:正常对照组、模型对照组(H/R)、H/R+miR-21 mimic组、H/R+miR-21 inhibitor组、H/R+miR-21 mimic+AS-Ⅳ组、H/R+miR-21 inhibitor+AS-Ⅳ组.除正常对照组外,其余各组置于三气培养箱中(1％O2、94％N2、5％CO2)孵育12 h缺氧处理后置于常规培养箱中培养复氧处理,H/R+miR-21 mimic+AS-Ⅳ组、H/R+miR-21 inhibitor+AS-Ⅳ组,造模同时,分别加入200μmol·L-1的AS-Ⅳ作用于细胞72 h.用流式细胞技术检测细胞凋亡、实时荧光定量-聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-21和PTEN的表达,免疫荧光检测Bcl-2蛋白的表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Caspase-3和Cyt-C的表达.结果 与模型对照组比较,正常对照组、miR-21 mimic组miR-21的表达量增加,凋亡百分率、PTEN表达量明显降低、Caspase-3和Cyt-C的表达降低,Bcl-2的表达量降低(P<0.05或P<0.01);与miR-21 mimic组比较,H/R+miR-21 mimic+AS-Ⅳ组miR-21的表达量增加,凋亡百分率、PTEN表达量明显降低、Bcl-2的表达量、Caspase-3和Cyt-C的表达降低;与miR-21 inhibitor组比较,H/R+miR-21 inhibitor+AS-Ⅳ组miR-21的表达量增加,凋亡百分率、PTEN表达量明显减少,Caspase-3和Cyt-C的表达降低(P<0.05或P<0.01).结论 黄芪甲苷可保护损伤心肌细胞,其机制可能是上调miR-21的表达靶向调控PTEN,减少Caspase-3、Bcl-2、Cyt-C的释放,抑制心肌细胞凋亡,减少心肌细胞损伤.
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