【摘 要】
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目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞(PBMC)炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP)对其调节的相关机制.方法 取IgAN患者(n=29)及健康人(n=16)外周血,分别通
【机 构】
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中南大学湘雅二医院肾内科湖南省肾脏疾病及血液净化重点实验室
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目的 探讨IgA肾病(IgAN)患者外周血单个核细胞(PBMC)炎性因子分泌及自身凋亡状态,以及雷公藤甲素(TP)对其调节的相关机制.方法 取IgAN患者(n=29)及健康人(n=16)外周血,分别通过酶联免疫吸附试验( ELISA)和硝酸还原酶法(Griess法)检测血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)和一氧化氮(NO)表达情况.体外培养IgAN患者PBMC,以不同浓度TP刺激PMBC,四唑盐比色间接法(MTT)检测TP对细胞生长的抑制效应.根据MTT结果,分别分为IgAN患者PBMC组、植物血球凝集素(PHA,10 mg/L,促细胞分裂原)模型组和PHA( 10 mg/L)+TP( 12.5 μg/L、25 μg/L)处理组.ELISA法检测上清液中TNF-α、IL-6的分泌情况；Griess法检测上清液中NO含量；流式细胞仪分析细胞凋亡率；RT-PCR法、Western印迹法检测PBMC中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、半胱天冬蛋白酶(caspase )-9、caspase-3基因和蛋白表达变化.结果 IgAN患者血浆TNF-α[( 131.57±50.61) ng/L比(30.24±18.93) ng/L,P＜0.01],IL-6[(76.36±25.21) ng/L比(35.08±16.59) ng/L,P＜0.01]和NO[(46.36± 12.93) μmol/L比(26.61:±:10.87) μmol/L,P＜0.01]均显著高于健康人,PBMC凋亡率亦显著高于健康人[(16.88±5.66)％比(8.67±3.87)％,P＜0.01].TP可抑制IgAN患者PBMC分泌TNF-α、IL-6和NO,诱导其凋亡；也可抑制Bcl-2表达,增加Bax、caspase-9、caspase-3表达.结论 IgAN患者体内PBMC处于高度活化状态,并且凋亡率增高.TP能有效抑制IgAN患者PBMC的炎性活化状态,并可能通过线粒体途径改变Bcl-2蛋白家族抗凋亡因子和促凋亡因子平衡而诱导IgAN患者PBMC凋亡.
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