论文部分内容阅读
[目的]研究蕨类植物DNA提取的方法,为进一步的遗传多样性以及分类学的研究提供基础.[方法]通过改变试剂的用量以及操作方法对CTAB法提取DNA方法进行了改进.①取0.5～1.0 g新鲜叶片,加液氮充分研磨成粉末,置于1.5 ml离心管中,加2%CTAB 600 μl及10μl巯基乙醇;②65℃水浴15 min(期间取出振荡1次),冷却;③加500 μl氯仿/异戊醇(24:1)上下颠倒数次至液相深绿色;④12 000 r/min离心3 min;⑤取上清液至一1.5 ml离心管,重复步骤③、④;⑥取上清液至一1.5ml离心管中,管内预装1 ml 95%乙醇.室温静置2 h;⑦12 000 r/min离心3 min;⑧弃上清,用70%乙醇(约400 μl)洗涤沉淀,真空干燥器下燥.干燥后加低温保存;⑨使用时加100 μl超纯水溶解.-25℃保存.提取出的DNA样品中加超纯水50 μl,混匀后,用石英比色杯于DU(R)800分光光度计中测定紫外消光值,根据其在260 nm和2.80nm波长处的光吸收值计算DNA产率,根据A360/A280判断DNA样品的纯度.DNA样品的浓度(μg/μl)为:在260 nm的紫外消光值×核酸稀释倍数×50/1 000.纯DNA样品A260/A280紫外消光值应为1.8,A260/A230值应大于20.A260/A280值大于1.9时,表明有RNA污染,小于1.6时,表明样品中存在蛋白质或酚污染.A260/230值小于2.0时表明溶液中有残存盐和小分子杂质,如核甘酸、氨基酸、酚等.分别对常规CTAB法和改进CTAB法提取出的蕨类植物DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测,以验证提取出DNA的质量.[结果]改进的CTAB法提取的蕨类DNA,其主带(基因组DNA)更加明亮,且与其他杂带区分明显,表明DNA的降解较少,DNA得率及纯度都有了很大提升.[结论]改良的CTAB提取法能够提取出高质量的蕨类植物DNA.