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[摘 要]目的：探讨制备益气养血口服液并建立其质量控制方法。方法：以人参、枸杞子、丹参、龙眼肉，制备益气养血口服液；采用薄层色谱对其中的人参、枸杞子、丹参进行定性鉴别；用高效液相色谱法测定其中人参皂苷Rg1的含量。结果：制得的口服液为标红色溶液；薄层色谱对人参、枸杞子、丹参特征斑点定性鉴别清晰，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上显相同的荧光斑点；人参进样量平均回水率为99.95%（RSD=1.12%）。结论：本制剂制备工艺简单，质量控制方法简便、准确、重现性好。
[关键词]益气养血口服液 制备 质量控制 高效液相色谱法
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0391-01
益气养血口服液是由人参、丹参等中药材经醇提水煎浓缩而成的中药制剂，具有益气养血、滋补肝肾、宁心安神的功效，临床用于治疗疲劳症，神疲倦怠、头昏乏力、少气懒言、腰膝酸软、失眠多梦等症。为有效控制益气养血口服液的质量，采用薄层色谱对处方中的人参、枸杞、丹参进行定性鉴别，并以人参有效成份为指标，采用高效液相色谱法测定其中人参苷Rg1的含量，以进一步保证该制剂的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器：waters高效液相色谱系统（waters 600 HPLCP PUMP，waters 2487紫外检测器，Minnium32色工作站）；MZITIFR-AE240型电子分析天平。
1.2 试药：人参二醇、人参三醇、人参Rg1、原儿茶醛，对照品（均由中国药品生物制品检定所提供）。苯、甲苯、醋酸、氯仿、环乙烷-丙酮、硫酸、乙腈为市售分析纯。
2 处方与制备
2.1 处方：人参200 g、枸杞子200 g、丹参100 g、龙眼肉100 g、吐温-8020 g、对羟基苯甲酸乙酯0.1 g、苯甲酸1 g、共制成1 000 ml。
2.2 制备：称取处方中人参、丹参、用80%乙醇作溶剂，浸渍24 h后进行渗漉，漉液另器收集，药渣与枸杞、龙眼肉等3味加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.25，加入乙醇65%，静置24 h，滤过，滤液与滤液合并，回收乙醇至无醇味。加入吐温-80 20 mg，加蒸馏水至900 ml，静置24 h，滤过，滤液调pH 5～7，加适量防腐剂，煮沸，冷却至5～10 ℃，放置24 h，滤过，滤液调至总量为1 000ml，罐装、灭菌、检验、包装即得。
3 质量检测
3.1 性状：本品为红棕色液体、味酸甜、微苦。
3.2 薄层色谱鉴别
3.2.1 取本品20 ml，照柱色谱法[1]试验，置于已处理好的大孔吸附树脂柱（玻璃柱内径约0.9 cm，长约13 cm，大孔吸附树脂DA201型，湿法装柱，用水50 ml预洗）上，用氨溶液（3→100）40 ml冲洗后，继续用水50 ml冲洗，最后用65%乙醇35 ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加7%硫酸的45%乙醇溶液15 ml，加热回流1 h，放冷，加氯仿10 ml提取，分取氯仿液，低温挥干，残渣加氯仿0.5 ml溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇和人参三醇对照品，加无水乙醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2]試验，吸取上述两种溶液各10 ？滋l分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸（7∶3∶0.1）为展开剂，展开、取出、晒干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显示清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显示相同紫红色的斑点。
3.2.2 取本品20 ml，加醋酸乙酯20 ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣用乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。另取枸杞2 g，加水40 ml，煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至约20 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取上述两种溶液各10 ？滋l分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.2）为展开剂，展开、取出、晒干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上显相同的蓝色荧光斑。
3.2.3 取本品20 ml，用稀盐酸调节pH至2，用乙醚20 ml提取，分取乙醚液，挥干，残渣用乙醚1 ml溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醚制成1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液5 ？滋l，分别点于同一含羟甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸-甲酸（80∶50∶8）为展开剂，展开、取出、晒干，喷以2%间苯三酚乙醇溶液与硫酸的等量混合置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的红色斑点。
3.3 检查
3.3.1 沉淀：本品允许有少量沉淀，振摇后均匀分散、无结块、无杂物。
3.3.2 密度：相对密度度为1.10～1.15[20℃，2005年版《中国药典》（一部）附录ⅦA]。
3.3.3 pH值：pH值应为5.0～7.0[2005年版《中国药典》（一部）附录ⅦG]。
3.3.4 微生物限度：细菌数≤100个/ml，酵母菌≤100个/ml，大肠杆菌不应检出。
3.3.5 其他：应符合2005年版《中国药典》（一部）附录IJ.合剂项下有关的各项规定。
3.4 含量测定
3.4.1 色谱条件：色谱柱为Themo（5.0 mmCx250.0 mm，5滋m），流动相为乙腈-0.05%磷酸（20∶80），流速为1 ml/min，色谱柱温度为30 ℃，紫外检测波长为203 nm波长处检测。
3.4.2 对照品溶液的制备：准确称取人参皂苷Rg1对照品0.52 mg，置于10 ml容量瓶中，加入甲醇，超声处理使其溶解，定溶、摇匀即得。 3.4.3 供试品溶液的制备：精密称取益气养血口服液25 ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次（20、20、10 ml），合并正丁醇，用氨试液50 ml洗涤1次，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 ml洗涤1次，分取正丁醇于干燥至恒温的蒸发皿内，水浴上挥干正丁醇，残渣加甲醇溶解并定量转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.4.4 阴性对照品溶液制备：按本品相同工艺制备缺人参的阴性对照药液，按“3.4.3”项中方法制备阴性对照品溶液。
3.4.5 对照品、供试品及阴性供试品溶液HPLC色谱研究：按上述色谱条件，分别精密吸取对照溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10 ？滋l注入液相色谱仪中，结果可见，在阴性对照品色谱图中与对照品溶液色谱图相应处无吸收峰，表明对供试品溶液中人参皂苷Rg1的含量测定无干扰。
3.4.6 标准曲线的绘制[5]：精容量取“3.4.2”项中人参皂苷Rg1对照品溶液，2、6、10、14、18 滋l，按“3.4.1”项中色谱条件进样测定峰面积，并以峰面积为横坐标，以进样量（滋g）为纵坐标作图，计算得回归方程：C=3.2575X10-7+4.0268X10-3（r=0.9995），在0.100～0.902 ？滋g之间的线性关系良好。
3.4.7 精密度试验：精容吸取人参皂苷Rg1的对照品溶液10 ？滋l，注入到高效液相色谱仪中，重复进样5次。结果人参皂苷Rg1峰面积相对标准差（RSD）=0.61%，提示所使用仪器的精密度良好。
3.4.8 稳定性试验：精密称取供试品10 ？滋l，在0、2、4、8 h分别注入液相色谱仪，测定峰面积，RSD=1.31%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
3.4.9 重现性试验：取一样品按正文所述制备5份供试液，分别进样，记录色谱，计算，RSD为1.3%，说明有良好重现性。
3.4.10 加样回收率试验：采用加样回收法，精密量取已测含量的益气养血口服液5分，分别加入一定量的人参Rg1对照品溶液，按“3.4.3”项中方法处理和“3.4.1”项中色谱条件进样，测定峰面积，计算回收率，人参皂苷的回收率为99.95%。RSD为1.12%，说明本方法有良好的回收率。
3.4.11 样品含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10滋l，注入高效液相谱仪中进行测定，并计算含量。
4 讨论
益气养血口服液在医院作为院内制剂用于临床疲劳症。人参是本处方君药：人参皂苷Rg1和人参二醇、人参三醇均为人参的有效成份，药理学研究具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳等功效[2]。采用此工艺简便、可控，用薄层色谱法鉴定对益气养血口服液中人参、枸杞、丹参斑点清晰，集中具有分离效果好、干扰少、灵敏度较高的特点；采用高效液色谱法测定本制剂中人参皂苷Rg1含量[3～5]，以控制其中人参的含量，制备中采用氨试洗液，除去酚酸性杂质。流动相曾采用以甲醇-水（25：75），甲醇-水（55：45），乙腈-水-磷酸（47：53：0.2），乙腈-水（35：65），乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相进行试验，在其他条件相同时，采用乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相，分离效果均较好，故此选择乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相。本结果表明，在此色谱条件下，采用高效液相色谱法测定益气养血口服液中人参皂苷Rg1的含量，方法简便、快速，重现性好，可作为益气养血口服液的质量标准。
参考文獻：
[1] 仲 英，唐文照，丁杏苞，等.愈风宁心冲剂提取工艺[J].中成药，1999，21（4）：162.
[2] 赖 红，吕水利.人参皂苷对老龄性改变的研究[J].中国医科大学学报，1996，25（3）：225.
[关键词]益气养血口服液 制备 质量控制 高效液相色谱法
中图分类号：R541.4 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2014）34-0391-01
益气养血口服液是由人参、丹参等中药材经醇提水煎浓缩而成的中药制剂，具有益气养血、滋补肝肾、宁心安神的功效，临床用于治疗疲劳症，神疲倦怠、头昏乏力、少气懒言、腰膝酸软、失眠多梦等症。为有效控制益气养血口服液的质量，采用薄层色谱对处方中的人参、枸杞、丹参进行定性鉴别，并以人参有效成份为指标，采用高效液相色谱法测定其中人参苷Rg1的含量，以进一步保证该制剂的质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器：waters高效液相色谱系统（waters 600 HPLCP PUMP，waters 2487紫外检测器，Minnium32色工作站）；MZITIFR-AE240型电子分析天平。
1.2 试药：人参二醇、人参三醇、人参Rg1、原儿茶醛，对照品（均由中国药品生物制品检定所提供）。苯、甲苯、醋酸、氯仿、环乙烷-丙酮、硫酸、乙腈为市售分析纯。
2 处方与制备
2.1 处方：人参200 g、枸杞子200 g、丹参100 g、龙眼肉100 g、吐温-8020 g、对羟基苯甲酸乙酯0.1 g、苯甲酸1 g、共制成1 000 ml。
2.2 制备：称取处方中人参、丹参、用80%乙醇作溶剂，浸渍24 h后进行渗漉，漉液另器收集，药渣与枸杞、龙眼肉等3味加水煎煮，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度1.25，加入乙醇65%，静置24 h，滤过，滤液与滤液合并，回收乙醇至无醇味。加入吐温-80 20 mg，加蒸馏水至900 ml，静置24 h，滤过，滤液调pH 5～7，加适量防腐剂，煮沸，冷却至5～10 ℃，放置24 h，滤过，滤液调至总量为1 000ml，罐装、灭菌、检验、包装即得。
3 质量检测
3.1 性状：本品为红棕色液体、味酸甜、微苦。
3.2 薄层色谱鉴别
3.2.1 取本品20 ml，照柱色谱法[1]试验，置于已处理好的大孔吸附树脂柱（玻璃柱内径约0.9 cm，长约13 cm，大孔吸附树脂DA201型，湿法装柱，用水50 ml预洗）上，用氨溶液（3→100）40 ml冲洗后，继续用水50 ml冲洗，最后用65%乙醇35 ml洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加7%硫酸的45%乙醇溶液15 ml，加热回流1 h，放冷，加氯仿10 ml提取，分取氯仿液，低温挥干，残渣加氯仿0.5 ml溶解，作为供试品溶液。另取人参二醇和人参三醇对照品，加无水乙醇制成每1 ml各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2]試验，吸取上述两种溶液各10 ？滋l分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯-甲酸（7∶3∶0.1）为展开剂，展开、取出、晒干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显示清晰，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显示相同紫红色的斑点。
3.2.2 取本品20 ml，加醋酸乙酯20 ml振摇提取，分取醋酸乙酯液，蒸干，残渣用乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。另取枸杞2 g，加水40 ml，煎煮30 min，滤过，滤液浓缩至约20 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取上述两种溶液各10 ？滋l分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（6∶4∶0.2）为展开剂，展开、取出、晒干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照品药材色谱相应的位置上显相同的蓝色荧光斑。
3.2.3 取本品20 ml，用稀盐酸调节pH至2，用乙醚20 ml提取，分取乙醚液，挥干，残渣用乙醚1 ml溶解，作为供试品溶液。另取原儿茶醛对照品，加乙醚制成1 ml含1 mg的溶液，作为对照品溶液5 ？滋l，分别点于同一含羟甲基纤维素钠为粘和剂的硅胶G薄层板上，以苯-醋酸-甲酸（80∶50∶8）为展开剂，展开、取出、晒干，喷以2%间苯三酚乙醇溶液与硫酸的等量混合置日光下检视。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上显相同的红色斑点。
3.3 检查
3.3.1 沉淀：本品允许有少量沉淀，振摇后均匀分散、无结块、无杂物。
3.3.2 密度：相对密度度为1.10～1.15[20℃，2005年版《中国药典》（一部）附录ⅦA]。
3.3.3 pH值：pH值应为5.0～7.0[2005年版《中国药典》（一部）附录ⅦG]。
3.3.4 微生物限度：细菌数≤100个/ml，酵母菌≤100个/ml，大肠杆菌不应检出。
3.3.5 其他：应符合2005年版《中国药典》（一部）附录IJ.合剂项下有关的各项规定。
3.4 含量测定
3.4.1 色谱条件：色谱柱为Themo（5.0 mmCx250.0 mm，5滋m），流动相为乙腈-0.05%磷酸（20∶80），流速为1 ml/min，色谱柱温度为30 ℃，紫外检测波长为203 nm波长处检测。
3.4.2 对照品溶液的制备：准确称取人参皂苷Rg1对照品0.52 mg，置于10 ml容量瓶中，加入甲醇，超声处理使其溶解，定溶、摇匀即得。 3.4.3 供试品溶液的制备：精密称取益气养血口服液25 ml，加水饱和的正丁醇振摇提取3次（20、20、10 ml），合并正丁醇，用氨试液50 ml洗涤1次，弃去氨液，再用正丁醇饱和的水50 ml洗涤1次，分取正丁醇于干燥至恒温的蒸发皿内，水浴上挥干正丁醇，残渣加甲醇溶解并定量转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
3.4.4 阴性对照品溶液制备：按本品相同工艺制备缺人参的阴性对照药液，按“3.4.3”项中方法制备阴性对照品溶液。
3.4.5 对照品、供试品及阴性供试品溶液HPLC色谱研究：按上述色谱条件，分别精密吸取对照溶液、供试品溶液及阴性供试品溶液各10 ？滋l注入液相色谱仪中，结果可见，在阴性对照品色谱图中与对照品溶液色谱图相应处无吸收峰，表明对供试品溶液中人参皂苷Rg1的含量测定无干扰。
3.4.6 标准曲线的绘制[5]：精容量取“3.4.2”项中人参皂苷Rg1对照品溶液，2、6、10、14、18 滋l，按“3.4.1”项中色谱条件进样测定峰面积，并以峰面积为横坐标，以进样量（滋g）为纵坐标作图，计算得回归方程：C=3.2575X10-7+4.0268X10-3（r=0.9995），在0.100～0.902 ？滋g之间的线性关系良好。
3.4.7 精密度试验：精容吸取人参皂苷Rg1的对照品溶液10 ？滋l，注入到高效液相色谱仪中，重复进样5次。结果人参皂苷Rg1峰面积相对标准差（RSD）=0.61%，提示所使用仪器的精密度良好。
3.4.8 稳定性试验：精密称取供试品10 ？滋l，在0、2、4、8 h分别注入液相色谱仪，测定峰面积，RSD=1.31%，表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
3.4.9 重现性试验：取一样品按正文所述制备5份供试液，分别进样，记录色谱，计算，RSD为1.3%，说明有良好重现性。
3.4.10 加样回收率试验：采用加样回收法，精密量取已测含量的益气养血口服液5分，分别加入一定量的人参Rg1对照品溶液，按“3.4.3”项中方法处理和“3.4.1”项中色谱条件进样，测定峰面积，计算回收率，人参皂苷的回收率为99.95%。RSD为1.12%，说明本方法有良好的回收率。
3.4.11 样品含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10滋l，注入高效液相谱仪中进行测定，并计算含量。
4 讨论
益气养血口服液在医院作为院内制剂用于临床疲劳症。人参是本处方君药：人参皂苷Rg1和人参二醇、人参三醇均为人参的有效成份，药理学研究具有抗氧化、抗衰老、抗疲劳等功效[2]。采用此工艺简便、可控，用薄层色谱法鉴定对益气养血口服液中人参、枸杞、丹参斑点清晰，集中具有分离效果好、干扰少、灵敏度较高的特点；采用高效液色谱法测定本制剂中人参皂苷Rg1含量[3～5]，以控制其中人参的含量，制备中采用氨试洗液，除去酚酸性杂质。流动相曾采用以甲醇-水（25：75），甲醇-水（55：45），乙腈-水-磷酸（47：53：0.2），乙腈-水（35：65），乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相进行试验，在其他条件相同时，采用乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相，分离效果均较好，故此选择乙腈-0.05%磷酸（25：75）为流动相。本结果表明，在此色谱条件下，采用高效液相色谱法测定益气养血口服液中人参皂苷Rg1的含量，方法简便、快速，重现性好，可作为益气养血口服液的质量标准。
参考文獻：
[1] 仲 英，唐文照，丁杏苞，等.愈风宁心冲剂提取工艺[J].中成药，1999，21（4）：162.
[2] 赖 红，吕水利.人参皂苷对老龄性改变的研究[J].中国医科大学学报，1996，25（3）：225.