钙调蛋白的N末端和C末端片段载体构建和蛋白制备

来源 :中国医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:xiaohan5213250
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目的 构建钙调蛋白(CaM)的 N 末端片段(N-lobe)、C 末端片段(C-lobe)及其钙离子(Ca2+)结合位点突变体(N-lobe,C-lobe34)原核表达载体并进行蛋白表达、纯化和活性鉴定。方法 将上述 cDNA 片段插入 PGEX-6p-3 质粒载体后转化大肠杆菌 BL21 感受态细胞,异丙基硫代-β-D 半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。利用 Glutathione-Sepharose 4B beads 进行分离纯化。采用 SDS-PAGE 检测目的 蛋白纯度和相对分子质量,Bradfo
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