【摘 要】
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目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清.方法:提取患者血清中的HCV RNA,并进行基因分型.取鉴定
【机 构】
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南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生统计系,江苏,南京,210029南京军区军事医学研究所,江苏,南京,210002;宜兴市第一人民医院,江苏,宜兴,214200;南京医科大学公共卫生学院流行病与卫生
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目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)F基因的原核表达载体,并在大肠杆菌TG1中进行表达,用以检测丙肝患者体内抗体,并制备抗血清.方法:提取患者血清中的HCV RNA,并进行基因分型.取鉴定为HCV 1b型的病毒,用RT-PCR扩增HCV F蛋白基因的序列.将扩增产物插入pGEM-T载体中,测序正确后,用EcoR I、BamH I双酶切后,再插入表达载体 pGEX-4T-2中,转化大肠杆菌TG1,在IPTG诱导下表达GST-F蛋白.用亲和层析法纯化GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠制备抗血清.并用纯化的GST-F蛋白进行ELISA法检测丙肝患者血清抗F蛋白抗体.结果:在细菌裂解液中检测到重组的融合蛋白,经Glutathione Sepharose 4B 亲和层析柱纯化获得较高纯度的GST-F 融合蛋白.应用Western blot方法检测证实,用纯化的GST-F蛋白免疫BALB/c小鼠得到了特异性的抗体.用纯化的GST-F蛋白进行ELISA检测120例丙肝患者血清抗F蛋白抗体,82例呈阳性.结论:通过上述方法制备的融合蛋白纯度较高,免疫小鼠获得的抗体具有良好的特异性.用纯化的目的蛋白检测丙肝患者血清抗F蛋白的抗体的阳性率为68%,与国外的报道接近,说明在HCV感染的自然病程中有F蛋白的产生,为研究HCV F蛋白及与HCV相关疾病的诊断和治疗提供了条件.
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