分析槐耳浸膏对人胃癌低分化细胞株MKN-45和中分化细胞株SGC-7901细胞凋亡及对细胞侵袭、转移相关的基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9表达的影响。
方法分别用0(阴性对照组)、5、10、20 mg/ml槐耳浸膏作用于MKN-45和SGC-7901细胞24 h,经吖啶橙-溴化乙啶(AO-EB)双荧光染色后,显微镜下观察其形态学表现;作用24、48、72 h后,采用流式细胞术检测细胞凋亡率;作用24 h后,采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MMP-2、MMP-9 mRNA表达情况,以凝胶电泳后条带吸光度值为其表达量。
结果荧光显微镜下观察发现,阴性对照组细胞绿染(正常细胞),大小均一,结构完整;随着槐耳浸膏浓度增加,凋亡细胞和坏死细胞比例增加,其中凋亡细胞黄染,形态不规则,细胞膜可见芽状突起,细胞核固缩、碎裂,染色质浓染并沿核膜分布;坏死细胞染成红色,大小、形态较均一。槐耳浸膏作用于MKN-45细胞24 h后,阴性对照组和5、10、20 mg/ml槐耳浸膏组的细胞凋亡率分别为(6.5±0.8)%、(14.6±1.0)%、(18.0±1.1)%、(23.1±1.2)%(F=333.972,P<0.01),作用48 h后分别为(7.3±1.2)%、(18.3±1.6)%、(24.5±1.3)%、(27.2±1.7)%(F=528.432,P=0.001),作用72 h后分别为(7.5±0.9)%、(50.2±1.6)%、(58.0±1.9)%、(69.0±1.4)%(F= 3 814.238,P<0.01)。槐耳浸膏作用于SGC-7901细胞24 h后,阴性对照组和5、10、20 mg/ml槐耳浸膏组细胞凋亡率分别为(12.9±1.0)%、(19.4±1.2)%、(22.0±1.7)%、(23.0±1.9)%(F=120.190,P<0.01),作用48 h后分别为(10.2±1.3)%、(40.9±1.4)%、(51.6±1.9)%、(66.2±1.9)%(F=1 281.342,P<0.01),作用72 h后分别为(27.4±1.8)%、(49.7±1.4)%、(65.1±1.4)%、(69.0±2.0)%(F=1 112.767,P<0.01)。槐耳浸膏诱导两种细胞凋亡时表现为时间和剂量依赖性(均P<0.01)。相同作用条件,SGC-7901细胞凋亡率较MKN-45细胞有增高趋势。槐耳浸膏作用于胃癌MKN-45细胞后,阴性对照组和5、10、20 mg/ml槐耳浸膏组MMP-2 mRNA表达量(吸光度)分别为0.64±0.02、0.49±0.01、0.36±0.02、0.32±0.01(F=274.321,P<0.01),MMP-9 mRNA表达量分别为0.71±0.01、0.54±0.02、0.47±0.02、0.39±0.02(F=203.948,P<0.01);SGC-7901细胞MMP-2 mRNA表达量分别为0.64±0.01、0.42±0.02、0.34±0.20、0.29±0.01(F=305.877,P<0.01),MMP-9 mRNA表达量分别为0.65±0.15、0.47±0.01、0.44±0.01、0.39±0.02(F=265.259,P<0.01);两种细胞MMP-2和MMP-9 mRNA表达水平均较阴性对照组减少(均P<0.05),且随着槐耳浸膏浓度的增加,二者表达水平逐渐降低。
结论槐耳浸膏在体外可诱导胃癌MKN-45和SGC-7901细胞凋亡,并可抑制MMP-2和MMP-9的表达,其作用可能和细胞分化程度有关。