【摘 要】
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目的 构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法 以含有全长cDNA的pCMVβCbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T A克隆,酶切亚
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目的 构建成骨细胞特异性转录因子Cbfa1重组腺病毒载体,以期用于骨缺损、脊柱融合的体内、外研究。方法 以含有全长cDNA的pCMVβCbfa1为模板,PCR扩增Cbfa1,T A克隆,酶切亚克隆到穿梭质粒pAdTrack -CMV上,在BJ5 183细菌内和pAdEasy 1同源重组,筛选阳性克隆,酶切、PCR及测序鉴定,线性化后脂质体法转染2 93T细胞进行包装、扩增,利用报告基因GFP对病毒滴度和感染效率进行监测,CsCl梯度离心纯化病毒。AdEasy1 Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western blotting检测Cbfa1蛋白的表达。结果 测序、酶切及PCR证实Cbfa1基因重组腺病毒载体构建成功。AdEasy1 Cbfa1感染NIH3T3细胞后Western blotting检测到Cbfa1蛋白的表达。结论 成功构建了含有小鼠Cbfa1基因的重组腺病毒载体,为下一步研究基因治疗骨缺损、脊柱融合奠定基础。
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