鲈鱼骨骼肌脯氨酸内肽酶的分离纯化、鉴定及分子克隆

来源 :中国食品科学技术学会第十三届年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:chenglian_chen
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  脯氨酸内肽酶(prolyl endopeptidase,PEP)[EC3.4.21.26]是一个大的胞质酶,属于一类新型的丝氨酸蛋白酶,参与降解肽激素和神经肽,其活性的异常会引起精神、认知过程的障碍.本研究通过硫酸铵盐析、阴离子交换层析等方法从鲈鱼骨骼肌中分离纯化得到分子量为84kDa的PEP.采用Western blotting和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorption ionization-time of flight-mass spectrometry,MALDI-TOF-MS)确认纯化的蛋白为脯氨酸内肽酶.进一步利用RT-PCR方法并结合cDNA快速末端快速扩增技术(Rapid Amplification of cDNA Ends,RACE)克隆得到脯氨酸内肽酶基因序列.该序列全长3029 bp,开放阅读框为2223bp,蝙码741个氨基酸,其理论分子质量84.12 kDa,等电点5.81,不合信号肽.利用IBCP的在线工具SOPMA对PEP二级结构进行预测,该蛋白的二级结构中.a螺旋(alpha helix)占26.05%,无规则卷曲(random coil)37.65%、延伸链(extend strand)占27.26%,由少量氨基酸残基构成的β转角(beta turn)占9.04%.利用同源性建模法构建的脯氨酸内肽酶属于α/β水解酶超家族,与野猪(Sus scrofa)具有较高同源性.这为进一步研究PEP参与到鱼肌肉软化的病理生理的过程提供参考.
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