【摘 要】
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背景与目的:本课题旨在探讨应用自制MAGE-A9单克隆抗体检测MAGE-A9在乳腺癌组织中的表达情况及其临床意义,从而为乳腺癌患者提供新的预后因子及可能的潜在治疗靶点.方法:根据MAGE-A9基因的全长序列设计出11个相应的抗原表位,对每个抗原表位人工合成一个含有10个氨基酸的肽段,将合成的目的肽段与pet28A载体质粒连接,转入E.coli大肠杆菌中,诱导目的蛋白的表达,继而用Ni+2层析柱纯化
【机 构】
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河北医科大学第四医院科研中心 河北医科大学第四医院肿瘤研究所免疫室
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背景与目的:本课题旨在探讨应用自制MAGE-A9单克隆抗体检测MAGE-A9在乳腺癌组织中的表达情况及其临床意义,从而为乳腺癌患者提供新的预后因子及可能的潜在治疗靶点.方法:根据MAGE-A9基因的全长序列设计出11个相应的抗原表位,对每个抗原表位人工合成一个含有10个氨基酸的肽段,将合成的目的肽段与pet28A载体质粒连接,转入E.coli大肠杆菌中,诱导目的蛋白的表达,继而用Ni+2层析柱纯化.纯化后的蛋白用于免疫BALB/c小鼠,以30μg/d的量进行免疫,免疫反应最好的小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞(SP2/0)进行融合,融合后的细胞进行细胞培养,ELISA筛选阳性细胞.将阳性细胞植于小鼠腹腔,所得腹水即为mAb,应用Western blot检测mAb的特异性.利用自制MAGE-A9 mAb应用免疫组织化学的方法检测正常睾丸组织及多种癌组织包括食管癌,胃癌,宫颈癌,子宫内膜癌,乳腺癌中MAGE-A9蛋白的表达情况.检测60例乳腺癌组织及其相应的癌旁组织中MAGE-A9蛋白的表达,分析其与乳腺癌患者临床病理学特征之间的关系.结论:作为肿瘤特异性抗原,MAGEA9有可能是乳腺癌预后不良的一个重要标记.
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