纤毛内运输复合体(IFT)中新组分的鉴定和功能研究

来源 :中国动物学会原生动物学分会第十八次学术讨论会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:billguo
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纤毛/鞭毛是一类突出于大多数真核细胞表面的毛发状细胞器,具有运动、环境感知和信号传导等重要功能.大部分纤毛蛋白通过纤毛内运输机制(Intraflagellar Transport, IFT)从胞体运输至纤毛.以衣藻(Chlamydomonas)IFT分子马达温敏突变体fla10为材料,传统生化方法已鉴定得到17个IFT蛋白.近年来,在线虫(Caenorhabditiselegans)和斑马鱼等纤毛模式生物的突变体中,研究获得多个新的IFT蛋白,因此我们推测衣藻鞭毛基质中可能存在低表达量的未知IFT蛋白.本研究利用N15体内标记的定量蛋白质组学技术,比较突变体fla10中IFT停止前后正常纤毛与短鞭毛中蛋白组成的差异,发现限制性温度诱导FLA10失活后,9个保守的鞭毛蛋白与已知IFT蛋白含量的变化趋势相似.为了研究这些潜在IFT蛋白的功能,我们分析了它们在线虫和斑马鱼中的同源基因.其中一个潜在IFT的线虫突变体unc-hk表现出染料摄取缺陷,其远端纤毛(distal segment)部分或完全缺失,导致纤毛全长明显缩短.活体荧光显微成像显示该潜在IFT的一个可变剪切体蛋白是纤毛中段(middle segment)的组成成分,但在纤毛远端能以1.55μm/sec的速度来回运动,快于其它已知的线虫IFT蛋白.在斑马鱼体内,原位杂交显示该IFT的mRNA在脑、前肾和库氏囊泡等纤毛组织中广泛分布.利用Morpholino敲降该潜在IFT后,斑马鱼产生多种典型的纤毛缺陷表型,包括心脏左右异位、脑积水、身体弯曲以及库氏囊泡纤毛缩短等.上述结果显示,我们鉴定得到一个广泛存在于纤毛模式生物中的新IFT蛋白.
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