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从河北省部分地区病猪中分离大肠杆菌,根据Genbank中登录的大肠杆菌不耐热肠毒素B亚基(LTB)基因序列,设计一对引物,采用PCR技术扩增LTB的编码基因,得到一条375bp的片段。将其连入Simple-T载体上,经酶切,PCR及序列测定法进行鉴定。测序正确后,将该基因插入到pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,将此重组质粒转化E-coli DE3感受态细胞,并用IPTG诱导,将诱导产物用SDS-PAGE和Wlestem-blot检测。结果显示LTB基因可以在大肠杆菌中高效表达,表达产物分子量约为14ku,与预计的蛋白分子量一致。Western-blot试验证明,该蛋白可以与大肠杆菌免疫血清产生特异性结合反应,具有良好的抗原性,为大肠杆菌亚单位疫苗的研究奠定了基础。