【摘 要】
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目的 研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)诱导的迟发性神经病(OPIDN)母鸡神经组织中自噬功能的动态变化,探索OPIDN发生的分子机制.方法 以TOCP为OPIDN诱导剂染毒母鸡建立OPIDN动物
【机 构】
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山东大学公共卫生学院毒理学研究所,山东济南250012
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目的 研究三邻甲苯磷酸酯(TOCP)诱导的迟发性神经病(OPIDN)母鸡神经组织中自噬功能的动态变化,探索OPIDN发生的分子机制.方法 以TOCP为OPIDN诱导剂染毒母鸡建立OPIDN动物模型,分别在TOCP染毒后1,5,10和21 d时间点处死动物,取脊髓和胫神经,利用透射电镜观察脊髓超微病理变化,SDS-PAGE和Western blotting检测脊髓和胫神经中自噬标志分子LC-3,p62/SQSTM1和自噬调控蛋白ATG 1,AMBRA 1,ATG 5,ATG 7,ATG 12,beclin-1和VPS34等相对含量的变化.结果 经口一次染毒750 mg·kg-1 TOCP可诱导母鸡出现典型的OPIDN症状,透射电镜观察可见TOCP染毒第10和21天时动物脊髓组织内神经元轴突发生变性,有髓轴突和无髓轴突中出现自噬泡大量堆积现象.Western blotting结果显示TOCP染毒引起母鸡脊髓和胫神经组织中自噬标志分子LC-3表达显著下降,自噬降解底物-p62/SQSTM1含量进行性增加.与对照相比,母鸡脊髓LC-3含量在TOCP染毒后第5和10天分别降低28.6％和23.2％,胫神经LC-3含量在染毒后第1,5,10和21天分别降低38.2％,49.1％,34.3％和15.5％ (P＜0.05),且LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著下降；母鸡脊髓中p62/SQSTM1在染毒后第1,5,10和21天分别增加46.2％,107.9％,108.5％和133.5％,胫神经中p62/SQSTM1在染毒后第10和21天分别增加93.1％和260.8％ (P＜0.05).同时,TOCP染毒显著影响了神经组织中自噬通路中关键自噬调控蛋白的表达.与对照相比,TOCP染毒母鸡脊髓和胫神经中ATG 1,AMBRA 1,ATG 5,ATG 12和beclin-1表达均显著下降,此外,母鸡胫神经中ATG 7和VPS34表达也显著降低.结论 TOCP染毒干扰了母鸡神经细胞中自噬的基础活性,这可能与OPIDN发生机制有关.
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