【摘 要】
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目的 探索六溴环十二烷(HBCD)神经毒性的分子机制.方法 反式维甲酸(RA)10 μmol·L-1RA诱导指数生长期的SH-SY5Y细胞48 h后,随机分为溶剂对照和A,B和C三个处理组,A组继续
【机 构】
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上海大学环境与化学工程学院环境污染与健康研究所,上海200444
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目的 探索六溴环十二烷(HBCD)神经毒性的分子机制.方法 反式维甲酸(RA)10 μmol·L-1RA诱导指数生长期的SH-SY5Y细胞48 h后,随机分为溶剂对照和A,B和C三个处理组,A组继续单独以10 μmol·L-1 RA处理,B组为RA和10 μmol·L-1 HBCD联合染毒组,C组为10 μmol· L-1 HBCD作用组.24 h时拍摄神经细胞突起生长程度,免疫荧光法检测细胞突起生长标志蛋白MAP2的表达变化.4和24 h后Rhodamine 123检测细胞线粒体膜电位,Fluo-4检测钙离子浓度,并分别收集以上三个时间点的细胞检测AMPK,mTOR,Akt和GAPDH的蛋白活性或含量变化,结果 24 h后,与RA处理组相比,HBCD联合RA处理组具有长细胞突起的细胞数量较RA组减少,HBCD单独处理组24 h后细胞突起生长数量明显减少,与对照组相当；RA组和HBCD与RA联合组MAP2表达在24 h显著较对照组增加,HBCD染毒组MAP2表达对照组无显著差异,HBCD与RA联合组以及HBCD组MAP2表达均低于RA组；4和24 h时RA组线粒体膜电位与对照组相比无显著差异(P＞0.05),RA联合HBCD组以及HBCD单独处理组的线粒体膜电位与对照组和RA组相比,4和24 h时均显著下降(P＜0.05)；RA组钙离子浓度[Ca2+]i与对照组相比24 h时显著升高(P＜0.05),RA与HBCD联合染毒组[Ca2+]i4h时较对照组和RA组升高(P＜0.05),24 h之后与RA组无显著差异(P＞0.05),但仍高于对照组(P＜0.05),HBCD组[ca2+]i在4和24 h均高于对照组和RA组(P＜0.05)；与对照组和RA组相比,RA与HBCD联合组和HBCD组4h时AMPK,mTOR和Akt表达均无变化,24 h后AMPK和mTOR表达增加,Akt表达降低.结论 HBCD对RA诱导分化的神经细胞有抑制细胞突起生长的作用,原因推测可能与线粒体膜电位下降、钙离子蓄积等线粒体功能损伤有关,对能量变化敏感的AMPK升高、促进细胞增殖的mTOR表达升高,可阻滞细胞分化,Akt表达降低则可能抑制细胞增殖.
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