【摘 要】
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目的 探讨无机砷对自噬流的影响及其在砷诱导皮肤角质形成细胞恶性转化中的作用,为深入探索砷的致癌机制提供新思路。材料与方法：以人皮肤角质形成细胞系HaCaT为研究对象,将其以100 nmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)处理30周以上,用实时无标记细胞分析仪(RTCA)检测细胞侵袭能力以判定细胞恶性转化表型,用蛋白质印迹法(western blot)检测自噬标志物LC3以及自噬特异性降解底物p62蛋白
【机 构】
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中国医科大学公共卫生学院环境毒理学研究室 中国医科大学公共卫生与预防医学实教学示范中心,辽宁沈阳1
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目的 探讨无机砷对自噬流的影响及其在砷诱导皮肤角质形成细胞恶性转化中的作用,为深入探索砷的致癌机制提供新思路。材料与方法：以人皮肤角质形成细胞系HaCaT为研究对象,将其以100 nmol/L亚砷酸钠(NaAsO2)处理30周以上,用实时无标记细胞分析仪(RTCA)检测细胞侵袭能力以判定细胞恶性转化表型,用蛋白质印迹法(western blot)检测自噬标志物LC3以及自噬特异性降解底物p62蛋白表达水平；用同样剂量NaAsO2处理HaCaT细胞0-6 h,以透射电镜观察细胞自噬小体数量,western blot检测LC3、p62以及自噬上游信号蛋白p-mTOR、BECLIN的表达水平。在有/无自噬流下游溶酶体功能抑制剂氯喹(CQ,30 μ mol CQ,2h)预处理条件下,对细胞进行NaAsO2处理,用western blot检测p62蛋白水平；以免疫荧光法标记LC3蛋白,以Lysotraker标记溶酶体,观察自噬小体与溶酶体融合状态,并用western blot检测溶酶体表面膜蛋白LAMP1与LAMP2的表达水平。
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