【摘 要】
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目的：探讨含12-bp的CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN107,CpG 107)对脑胶质瘤U87细胞(WHO gradeⅣ)的放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法：采用MTT法检测CpG ODN107对U87细胞的放射
【机 构】
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第三军医大学药学院药理学教研室,重庆400038
【出 处】
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中国药理学会第十一届全国化疗药理学术研讨会
论文部分内容阅读
目的：探讨含12-bp的CpG寡脱氧核苷酸(CpG ODN107,CpG 107)对脑胶质瘤U87细胞(WHO gradeⅣ)的放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法：采用MTT法检测CpG ODN107对U87细胞的放射增敏作用,同时采用non-CpG ODN作为阴性对照,CpG ODN1826作为阳性对照；采用流式细胞术检测对细胞凋亡的影响；采用透射电镜观察自噬体的形成；采用脂质体转染技术将GFP-LC3质粒转入U87细胞,并采用激光共聚焦显微镜观察转染效率和GFP-LC3融合蛋白示踪；采用Western blot检测自噬标志性蛋白LC3与Beclin-1的表达；采用MTT法检测自噬抑制剂 3-MA对CpG ODN107放射增敏作用的影响.结果：nonCpG ODN不具有放射增敏作用；单独给予3、10、30μg/mL的CpG ODN 107或CpG ODN1826的抑制率较低,提示单独的CpG ODN107或CpG ODN1826对U87细胞毒性较小；单独IR组的抑制率为7.56％,提示U87细胞对5Gy射线照射不敏感；3、10、30μg/mL的CpG ODN107或CpGODN1826分别联合射线照射时的抑制率呈剂量依赖性的升高,分别为21.38％、38.01％、42.80％、24.74％、41.14％和42.63％,提示CpG ODN107与CpG ODN1826均具有放射增敏作用,且两者的放射增敏作用相当.与单独的IR组比较,CpG ODN107联合射线并不能诱导细胞凋亡的发生,但却可明显增加U87细胞中自噬体的形成,自噬标志性蛋白LC3Ⅱ与Beclin-1的表达,U87细胞中GFP-LC3融合蛋白聚积成绿色荧光斑点增多,上述结果 表明,CpG ODN107联合射线能显著诱导U87细胞自噬性死亡而非凋亡.结论：体外实验证实CpG ODN107具有放射增敏作用；从自噬形成过程中的双层膜结构、自噬溶酶体中的酸性囊泡、自噬形成过程中的标志性蛋白等各个阶段进行确证,表明CpG ODN 107的放射增敏作用与诱导脑胶质瘤细胞自噬性死亡有关而与凋亡无关.
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