【摘 要】
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目的：研究低剂量PM2.5 慢性暴露对人支气管上皮细胞的生物效应,并探究长链非编码RNA(lncRNA)在此过程中发挥的功能作用.方法：采用20μg/ml 的PM2.5 长期慢性处理人支气管上皮细胞16HBE,构建PM2.5 诱导16HBE 细胞恶性转化模型.采用CCK8、细胞划痕试验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验和流式细胞术分别检测PM2.5 诱导细胞恶性转化过程中细胞增殖能力、凋亡和周
【机 构】
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广州医科大学公共卫生学院,广州市番禺区新造镇,511436
【出 处】
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中国毒理学会表观遗传毒理专业委员会第一次学术大会
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目的：研究低剂量PM2.5 慢性暴露对人支气管上皮细胞的生物效应,并探究长链非编码RNA(lncRNA)在此过程中发挥的功能作用.方法：采用20μg/ml 的PM2.5 长期慢性处理人支气管上皮细胞16HBE,构建PM2.5 诱导16HBE 细胞恶性转化模型.采用CCK8、细胞划痕试验、平板克隆形成实验、软琼脂克隆形成实验和流式细胞术分别检测PM2.5 诱导细胞恶性转化过程中细胞增殖能力、凋亡和周期的变化；lncRNA 芯片分析16HBE 恶性转化细胞与对照细胞lncRNA 差异表达谱；qRT-PCR 检测lncRNA SPRY4-IT1 的表达；转染质粒载体过表达SPRY4-IT1,观察其对细胞恶性表型的影响,探讨其功能作用.结果：与正常16HBE 细胞比较,CCK8 实验结果显示,随着PM2.5 染毒代数的增加细胞活力逐渐升高；细胞划痕实验结果显示,染毒细胞的迁移率明显上升；平板克隆形成实验结果显示,染毒细胞增殖能力逐渐增加；软琼脂克隆形成实验结果表明,染毒细胞的肿瘤球形成率明显增高；细胞凋亡检测结果显示,与正常16HBE 细胞相比较,PM2.5转化细胞的凋亡率明显下降；细胞周期检测结果显示,与正常16HBE 细胞比较,恶性转化细胞周期G1 期比例下降,S 期比例上升.lncRNA 芯片分析显示,PM2.5 诱导细胞恶性转化过程中表现显著的lncRNA 差异表达,SPRY4-IT1 在PM2.5 致人支气管上皮细胞恶性转化过程中的表达先升高后降低.通过生物数据库预测,SPRY4-IT1 在肺腺癌组织中低表达.在恶性转化细胞中转染质粒载体过表达SPRY4-IT1,实验结果显示,与转染阴性载体NC 组比较,SPRY4-IT1 过表达组,细胞活力下降；细胞迁移能力减弱；克隆形成率降低；细胞周期G1 期比例上升,S 期比例下降.提示SPRY4-IT1 介导了PM2.5 致人支气管上皮细胞的恶性转化过程.结论：低剂量PM2.5 慢性染毒可诱导人支气管上皮细胞恶性转化,并诱导lncRNA 差异表达谱改变,其中lncRNA SPRY4-IT1 介导了PM2.5 诱导人支气管上皮细胞恶性转化过程,发挥着重要的功能作用.
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