论文部分内容阅读
将含A型产气英膜梭菌a毒素基因的质粒pKMA100用核酸内切酶BamHI和HindⅢ双酶切,经电泳分离、透析袋电洗脱法回收了0.95kbα毒素基因片段,再将载体pET-28b(+)用BamH I和Hind Ⅲ双酶切,然后将处理好的pET-28b(+)与0.95kb的a毒素基因片段进行连接、转化。经BamHI和HindⅢ酶切分析和序列分析,证明重组质粒pXETA1含有α毒素基因,且具有正确的阅读框架。构建的重组菌株BL21(DE<,3>)(pXETA1)能表达α毒素,但已经完全丧失其毒性。经SDS~pAGE和薄层凝胶扫描分析,IPTG诱导后的BL21(DE3)(pXETA1)所表达的目的蛋白占菌体总蛋白的33.21℅。经western blot分析和免疫试验结果表明,表达产物能被a毒素抗血清识别,且免疫小鼠后,用强毒株培养上清攻击,结早免疫小鼠能抵抗至少4LD<,100>的攻击,这说明表达产物具有良好的免疫原性。