果树病腐菌(EJLY2098)产β-甘露聚糖酶的分离纯化及全长cDNA的克隆与表达

来源 :第五届中国酶工程学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:nj_lcj
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本文以魔芋精粉为诱导底物,对果树病腐菌EJLY2098进行诱导培养产β-甘露聚糖酶,用正交试验优化诱导培养基,用DEAE-离子交换色普和疏水色普分离纯化β-甘露聚糖酶,并对其酶学进行分析.利用Genbank的同源序列设计简并引物,通过SMART-RACE技术从高活性产酶菌株EJLY2098的mRNA中克隆出β-甘露聚糖酶的全长cDNA,在pPICZaA质粒中构建表达载体,电转化毕氏酵母.重组表达含有组氨酸标签的β-甘露聚糖酶,用Ni-柱进行纯化,并对融合蛋白的酶学性质和天然蛋白酶学性质进行比较.
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