【摘 要】
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本研究利用原核表达系统和杆状病毒表达系统分别表达了亨得拉和尼帕病毒核蛋白(N),以此免疫Balb/C小鼠,成功地制备了4株N蛋白单抗(2株抗NiV和2株抗HeV).Western Blot及间接免疫荧光检测表明4株单抗对2种病毒的N蛋白具有较强的交叉反应性,说明它们识别2种病毒上共同的抗原表位.随后,利用随机肽库技术和分段表达的N蛋白重叠多肽对4株单抗进行识别表位鉴定.结果发现了2个新的线性表位.
【机 构】
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军事医学科学院军事兽医研究所,长春,130062;吉林大学畜牧兽医学院,长春,130062 军事医
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本研究利用原核表达系统和杆状病毒表达系统分别表达了亨得拉和尼帕病毒核蛋白(N),以此免疫Balb/C小鼠,成功地制备了4株N蛋白单抗(2株抗NiV和2株抗HeV).Western Blot及间接免疫荧光检测表明4株单抗对2种病毒的N蛋白具有较强的交叉反应性,说明它们识别2种病毒上共同的抗原表位.随后,利用随机肽库技术和分段表达的N蛋白重叠多肽对4株单抗进行识别表位鉴定.结果发现了2个新的线性表位.它们的序列分别是XXKLXRXXXX(N1H5)、XXFKREMXXX(N4E2),分别位于N蛋白的15～23aa和442～453aa.表位序列在2种病毒间高度保守,说明是他们的共同表位.本研究为更好地了解亨尼帕病毒核蛋白的抗原结构和制备有效的免疫检测试剂打下了基础.
其他文献
研究目的:应用单抗对PrP的分子特性进行研究,建立疯牛病、羊痒病免疫学检测方法;方法:原核表达牛、羊PrP,制备特异性单抗,Western blotting、IHC、分段表达方法鉴定单抗的免疫反应性和抗原表位;结果:获得免疫学反应特性多样化的系列单抗,分别针对5个抗原表位,单抗2H3、4H10可特异识别羊PrP,根据2H3所针对的抗原表位,推断出第208位氨基酸是牛、羊PrP特异性抗原表位的关键位
基于引物自身结构的动力学变化对FAM荧光信号的影响,参照GenBank上鹅细小病毒(GPV)B株基因序列设计合成了特异性单一荧光引物(LXXTM引物),建立了定量检测鹅细小病毒的实时荧光定量PCR方法,结果表明,该方法能够检出GPV基因质粒拷贝数达102数量级,检测到的GPV病毒核酸最低量可以达到0.25pg.本方法对鸭瘟病毒(DPV)、雏鹅新型病毒性肠炎病毒(NGVEV)和正常鹅胚尿囊液及鹅组织
将本实验室分离保存的NA-1株鹅副黏病毒(GPMV)经SPF鸡胚增殖,收集鸡胚尿囊液进行病毒纯化,提取病毒基因组RNA.参考GenBank已收录的ZJ1株GPMV基因组序列,设计了8对特异性引物,RT-PCR法分别特异性的扩增出病毒各基因片段,并将各目的基因片段回收纯化,克隆PGEM-T载体,转化大肠杆菌DH5α,小提质粒选取阳性克隆酶切鉴定并进行序列测定,对测定结果进行拼接得到全长cDNA序列(
我国鸡群中鸡贫血病毒(CAV)和禽网状内皮增生病病毒(REV)的感染已相当普遍,本研究用1日龄SPF鸡感染CAV以及共感染REV,结果表明,在用禽流感疫苗免疫后,CAV和REV单独感染均能显著的抑制鸡体对禽流感病毒(AIV,H5和H9)疫苗的免疫反应,在CAV和REV共感染后,这种抑制作用更为明显.CAV单独感染后能够抑制鸡对新城疫病毒(ND)和传染性法氏囊病病毒(IBDV)疫苗的免疫反应,但与对
从发生免疫和生长抑制病的肉仔鸡中分离到了一种新的病毒,对其生长特性、理化特性、形态特性和核酸类型等方面进行了初步鉴定.该病毒粒子呈不规则的六边形,近似圆形或椭圆形,直径40～70nm.病毒核酸为双链RNA.能够在10日龄SPF鸡胚上生长,并引起鸡胚病变、死亡、矮化,增殖的高峰期为感染后72h,但不能在Vero细胞、PK15和鸡胚成纤维细胞(CEF)上生长.该病毒对20％乙醚有较强的耐受性,对4.8
在国内外首次完成了番鸭源新城疫病毒分离株全基因组序列.用RT-PCR和5-RACE方法分段扩增出番鸭源新城疫病毒分离株FP1/02的16条cDNA片段,分别克隆到pMD18-T质粒载体并测序,经DNAstar软件进行拼接获得了番鸭源新城疫病毒FP1/02株全基因组序列.经测序结果表明,NDV FP1/02株与鹅源浙江株ZJ1和上海株SF02同源率分别为99.0％和99.1％,与鸡源NDV参考株He
选取国内1997-2005年间分离的新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)24株,经蚀斑纯化克隆其血凝素-神经氨酸酶(HN)基因,结合在GenBank发表的36株国内外不同时期的NDV毒株,进行氨基酸遗传变异分析,并利用SPSS8.0软件对其不同片段的氨基酸进行同源相关比较.结果显示:所有国内NDV野毒氨基酸高度同源,同源率为94.4％～99.4％;而与疫苗株LaSo
在流行病学调查的基础上,分别用H5N1亚型禽流感病毒分离毒株A/Chicken/Huabei/2004、A/Duck/Guangxi/2004、A/Goose/Dongbei/2004对157羽鸽子分别经滴鼻、点眼、口服和肌肉注射的途径进行人工感染试验,攻毒剂量约为每羽份104EID50,试验设43羽鸽子为正常对照、9只SPF鸡为H5N1亚型禽流感病毒敏感动物攻毒对照.采用临床症状观察、病理剖解、
构建了惠阳胡须鸡IFN-α/pGEXT-6P-1的重组质粒,并在BL21中实现高效表达,利用glutathione sepharose 4B亲和层析柱对重组蛋白进行了纯化.重组ChIFN-α的抗病毒活性为3.16×106 U/mg.试验表明,纯化的重组蛋白在细胞水平和鸡胚水平上都表现出很高的抗禽流感病毒活性,当ChIFN-α分别达到100U与5000U时,对病毒繁殖的抑制率都可达到100％.
利用RT-PCR技术扩增出岭南黄鸡γ干扰素(IFN-γ)基因,将其克隆到pMD18-T载体上,并进行序列测定.再将克隆的IFN-γ基因插入到pET-32a质粒中构建原核表达载体,将其转化到Origami(DE3)感受态细胞中,经IPTG诱导获得了预期的表达蛋白,表达的融合蛋白占菌体蛋白的46％.菌体经超声裂解后离心取上清通过镍离子亲和树脂进行了纯化.纯化的蛋白酶切后获得重组鸡IFN-γ,经生物活性