麦长管蚜实时定量PCR内参基因的筛选

来源 :中国植物保护学会2016年年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:pudding_dophin
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  实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术具有高灵敏度、可重复性、精确性的特点,是目前最常用的基因定量分析方法之一。进行qRT-PCR试验时,内参基因必须在给定的实验条件下稳定表达。为促进基因表达研究,获得更准确的表达量数据,筛选相对稳定的内参基因是必要的基础工作。麦长管蚜(Sitobion avenae)是我国麦类作物的主要害虫之一,具有分布广、数量大、繁殖力强的特点,为了适应环境变化,能够进行远距离迁飞,并可以传播植物病毒,影响小麦植株的正常生长,导致小麦产量严重下降,给农业生产造成巨大损失。因此,麦长管蚜基因表达分析的研究对农业麦蚜害虫防治具有重要意义,然而目前尚无关于麦长管蚜内参基因稳定性研究的报道。本研究运用4种方法(ΔCt法、BestKeeper,NormFinder和geNorm),结合一个在线工具RefFinder,分析评价qRT-PCR实验中麦长管蚜10种常用持家基因:pT-actin 1(ACT)、ubiquitin ribosomal protein S27A fusion protein(RpS27S)、vacuolar-type H+-ATPase(v-ATPase)、28S ribosomal RNA(28S)、ribosomal protein S11(RPS11)、ribosomal protein L14(RPL14)、SDHB(succinate dehydrogenase B)、NADH(NADH dehydrogenase)、elongation factor 1 alpha(EF1a)和heat-shock protein 90(HSP90),在不同实验条件下(不同发育时期、不同温度胁迫、不同密度处理、不同组织部位、不同药剂处理、报警信息素处理、抗生素处理和不同人工食物饲喂)的表达稳定性。为进一步分析麦长管蚜和其他生物内参基因稳定性奠定了基础。在利用该技术成功阐明了多种昆虫基因功能的同时,为控制和防治农业害虫领域奠定了研究基础。
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