【摘 要】
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目的 构建具有拮抗IL-4作用的IL-4变异体(IL-4RA)的表达载体,并通过真核宿主细胞表达变异蛋白. 方法 设计突变引物,从小鼠的PBMC细胞提取总RNA,R-PCR方法扩增目的片断.将
【机 构】
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广州市儿童医院呼吸科,510120
【出 处】
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中华医学会2006年全国儿童过敏性疾病诊断与治疗进展研讨会
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目的 构建具有拮抗IL-4作用的IL-4变异体(IL-4RA)的表达载体,并通过真核宿主细胞表达变异蛋白.
方法 设计突变引物,从小鼠的PBMC细胞提取总RNA,R-PCR方法扩增目的片断.将该片断构建在真核表达载体上,并在真核细胞BHK-21中表达,通过Eilsa方法检测变异蛋白的表达.
结果 通过测序分析及限制性酶切鉴定,采用RT-PCR成功的完成了IL-4RA的扩增和表达载体的构建,重组载体转染真核细胞后在上清中检测到IL-4RA的表达.
结论 经构建含有目的基因的逆转录病毒载体,能够成功的在真核细胞表达出IL-4RA.
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