肿瘤抑素T7肽及其衍生物T7-NGR的载体构建及表达

来源 :第七届全国生化与生物技术药物学术年会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:jiajiadedaan1
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目的:为了提高作用靶向性,将导向肽NGR与肿瘤抑素T7肽的C端连接,获得T7肽及其衍生物T7-NGR的载体。方法:通过PCR和合成基因序列方法分别构建了肿瘤抑素T7肽及T7-NGR的克隆载体pMD-T7和pMD-T7N,经酶切和测序鉴定后,将两种载体分别双酶切,经低熔点琼脂糖凝胶电泳分离后,切下目的片段,与酶切回收的质粒载体pET28a在低熔点琼脂糖中直接进行连接反应。阳性克隆经酶切和测序鉴定,转化感受态E.coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。结果:酶切和测序鉴定结果正确,分别成功构建表达载体pET-T7和pET-T7N,经IPTG诱导,完成了表达条件的优化。Tricine-SDS-PAGE凝胶电泳结果显示,当IPTG浓度为1mmol/L时,25℃诱导8h,分别获得了T7肽和T7-NGR的表达产物。结论:已经成功构建T7肽和T7-NGR的表达载体,获得了表达产物,该实验未见国内外报导,为下一步的小肽活性实验奠定了基础。
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