【摘 要】
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梭子蟹肌孢虫(Ameson sp.)是感染三疣梭子蟹的常见病原,为了及早确定其在梭子蟹体内的感染程度,本实验通过一对自设引物建立了梭子蟹肌孢虫的SYBR Green I实时荧光定量PC
【机 构】
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中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部海洋与河口渔业资源及生态重点开放实验室,上海200090;上海海洋大学水产与生命学院,上海201306中国水产科学研究院东海水产研究所,农业部海洋与河口渔业资源
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梭子蟹肌孢虫(Ameson sp.)是感染三疣梭子蟹的常见病原,为了及早确定其在梭子蟹体内的感染程度,本实验通过一对自设引物建立了梭子蟹肌孢虫的SYBR Green I实时荧光定量PCR (qPCR)检测方法.结果 显示,该方法在引物终浓度为0.2μmol/L、退火温度60℃时扩增效果最好,扩增熔解曲线只获得了一个单峰.该方法的扩增产物阈值循环数(Ct)与模板起始量对数的关系为Ct=-3.26X+ 35.57(X为质粒拷贝数的对数),相关系数为0.999,扩增效率为101.45％,介于最优值范围(95-105％)；检测灵敏度下限可达2.0× 101 copies/μL,组内和组间重复性好.利用该荧光定量PCR方法与实验室先前建立的套式PCR方法分别对养殖三疣梭子蟹样品进行检测,结果显示,套式PCR方法的检测率为64.7％,而荧光定量PCR方法的检测率为82.3％,表明本研究建立的荧光定量PCR方法具有更高的灵敏度,该方法可为梭子蟹“牙膏病”的早期诊断与防控提供良好的技术支撑.
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