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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的,严重危害全球养猪业的病毒性传染病.PRRSV非结构蛋白Nsp9具有RNA
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猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是由PRRS病毒(PRRSV)引起的,严重危害全球养猪业的病毒性传染病.PRRSV非结构蛋白Nsp9具有RNA依赖的RNA聚合酶活性,其在病毒基因复制和转录过程中发挥着关键的作用,是研发抗PRRSV药物的理想靶蛋白.本实验表达并纯化了可溶性Nsp9重组蛋白,将其免疫成年雄性双峰驼,进而构建了噬菌体展示重链抗体可变区文库.利用噬菌体展示技术筛选到了8株Nsp9特异性纳米抗体.为了研究纳米抗体的抗病毒功能,我们构建了稳定表达纳米抗体Nb6和Nb7的MARC-145细胞系.病毒感染实验结果表明,胞内表达的Nb6可以抑制不同PRRSV毒株(SD-16、JX-A1、GD-HD、VR2332)在MARC-145细胞中的增殖,并且当接毒量小于或等于0.01 MOI时Nb6可以完全阻断病毒在MARC-145细胞中的增殖.进一步的研究发现,胞内表达的Nb6可以与病毒编码的Nsp9相互作用,并通过抑制PRRSV基因的复制和转录从而抑制病毒的增殖.本实验首次筛选到了PRRSV Nsp9特异性纳米抗体,为Nsp9及其功能的研究提供了有用的工具,其中Nb6有望开发成为新型的抗PRRSV药物.
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