【摘 要】
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本文运用Crispr/Cas9技术在HEK293T细胞中敲除DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)基因,并成功获得了一株完全敲除DNMT3a的细胞株HEK293T-KO.为了研究DNMT3a敲除对细胞表达重组蛋白的影
【机 构】
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上海交通大学药学院,细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心
【出 处】
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中国生物工程学会第六次全国会员代表大会暨第九届学术年会
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本文运用Crispr/Cas9技术在HEK293T细胞中敲除DNA甲基转移酶3a(DNMT3a)基因,并成功获得了一株完全敲除DNMT3a的细胞株HEK293T-KO.为了研究DNMT3a敲除对细胞表达重组蛋白的影响,以GFP作为模式蛋白,在HEK293T-WT和-KO细胞株分别转染表达EGFP的质粒,观察并比较转染效率和蛋白表达水平.结果显示,细胞中敲除DNMT3a基因会严重影响细胞的生长;并且与野生型细胞株相比,HEK293T-KO细胞株的转染效率显著降低;进一步采用流式细胞术检测转染48h之后GFP的荧光强度作为细胞平均GFP表达量的指标,发现敲除细胞株的平均绿色荧光强度也显著低于野生型细胞株.数据说明DNMT3a对外源蛋白在HEK293T细胞中的表达具有重要作用.
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