【摘 要】
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目的 血友病B (hemophilia B,HB)是X连锁隐性遗传性出血性疾病,由凝血因子ⅨX基因(F9)缺陷所引起.目前对F9基因突变的检测多采用F9基因直接测序法,由于F9基因突变种类繁多,该方法较为费时.高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM)分析是新兴的、低成本、操作简便的高通量突变扫描和基因分型技术.本研究旨在利用HRM技术,建立简便有效的HB基因诊断方
【机 构】
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上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心检验科,上海 200127 上海交通大学医学院附属瑞金医院输
【出 处】
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中国工程科技论坛第115场——临床分子诊断暨第二届中国分子诊断技术大会
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目的 血友病B (hemophilia B,HB)是X连锁隐性遗传性出血性疾病,由凝血因子ⅨX基因(F9)缺陷所引起.目前对F9基因突变的检测多采用F9基因直接测序法,由于F9基因突变种类繁多,该方法较为费时.高分辨率溶解曲线(high resolution melting,HRM)分析是新兴的、低成本、操作简便的高通量突变扫描和基因分型技术.本研究旨在利用HRM技术,建立简便有效的HB基因诊断方法.方法 收集已知F9基因1～7号外显子突变的HB患者45例、未进行基因诊断的HB患者20例以及10名健康对照者的外周血标本.抽提外周血基因组DNA.采用PCR-HRM技术对已知的F9基因突变进行筛查.通过突变扩增片段与正常对照扩增片段溶解曲线的比较,分析HRM方法的可行性.由于F9基因8号外显子是发生突变的热点区域,且含有4个多态性位点,故采用PCR扩增结合直接测序进行突变检测.采用F9基因1～7号外显子PCR-HRM突变筛查及8号外显子的DNA直接测序,对20例未知F9基因突变的HB患者进行基因诊断.结果 45例已知F9基因突变的HB患者中,43例患者的突变可通过PCR-HRM分析进行检测,检测率约为96％.20例未进行基因诊断的HB患者中,通过对F9基因8号外显子的PCR扩增和测序,在6例患者的F9基因中检测到相应突变；通过对F9基因1～7号外显子进行PCR-HRM突变筛查以及可疑PCR片段的测序,其余14例HB患者均得到了基因诊断.结论 本研究建立了HB基因诊断的新方法,即PCR-HRM筛查F9基因1～7号外显子突变结合F9基因8号外显子的DNA测序,该方法操作简便、结果可靠.
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