DR中医证候观察及补肾活血法对高糖下共同培养的RGCs与视网膜M(u|")ller细胞mGluRs及Homer蛋白影响的研究

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目的:1.观察糖尿病性视网膜病变(diabetic retinopathy, DR)患者中医证候情况,为中医药治疗DR提供依据。2.探讨高糖对共同培养的视网膜神经节细胞(retinal ganglion cells, RGCs)与视网膜Miiller细胞代谢型谷氨酸受体(metabotropic glutamate receptors, mGluRs)及Homer蛋白的影响,以及补肾活血中药对其干预的作用。方法:1.通过问卷调查并根据制定的“糖尿病性视网膜病变患者中医证素评定表”从病性和病位证候要素观察DR患者中医证候。2.体外培养新生5-7d SD大鼠视网膜Miiller细胞并采用第2代与经两步筛选法纯化的新生1d SD大鼠RGCs共同培养。3.以中药血清学方法制备补肾活血中药含药血清和正常大鼠血清。4.采用共同培养5d的细胞,随机分为正常对照组、正常中药组、高糖组、高糖中药组。5.干预48小时后免疫印记检测各组mGluRs以及Homer蛋白的表达。6.SPSS17.0统计分析所得数据。结果:1.本研究58例DR患者病性证素按出现频率从高到低依次为:阴虚>血瘀>气郁=痰湿>血虚>阳虚>气虚>火热。2.本研究58例DR患者病位证素按出现频率从高到低依次为:。肾>肝>脾>肺>胃。3.高糖组与正常对照组相比较,mGluR1、mGluR5、mGluR2/3及mGluR4升高,差异有统计学意义(P<0.05),mGluR7及Homer蛋白差异无统计学意义(P>0.05)。4.正常中药组与正常对照组相比较mGluR1升高、Homer蛋白降低,差异有统计学意义(P<0.05),mGluR5、 mGluR2/3、mGluR4及mGluR7差异无统计学意义(P>0.05)。5.高糖中药组与高糖组相比较,mGluR1、Homer、mGluR2/3、mGluR4及mGluR7降低,差异有统计学意义(P<0.05),mGluR5降低,但其差异无统计学意义(P>0.05)。结论:1.DR患者中,阴虚、血瘀是主要的病性证素,肝、肾是主要的病位证素。2.高糖条件可导致共同培养的RGCs与视网膜Miiller细胞mGluRl、 mGluR5、表达量升高,并使:mGluR2/3, mGluR4表达上调,促进神经生长因子释放,启动负反馈调节,抑制谷氨酸释放,这可能是细胞对短期高糖干预的一种代偿性反应。3.补肾活血中药降低高糖条件下共同培养的RGCs与视网膜Miiller细胞mGluR1、mGluR2/3、mGluR4、mGluR7、以及Homer蛋白的表达量,推测其原因可能与补肾活血中药能提高高糖条件下Muller细胞中谷氨酰胺合成酶(glutaminesynthetase, GS)活性,促进谷氨酸转化为谷氨酰胺,从而减少突触间隙谷氨酸含量有关。
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