【摘 要】
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猪乙型脑炎病毒(JEV)是一种人畜共患的虫媒病毒,具有传染性和危险性,研究这类病毒需要一种安全的研究代替工具,假型病毒技术为解决这些问题提供了一种有效的研究手段。为了构
【机 构】
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四川农业大学预防兽医研究所猪病研究中心;
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猪乙型脑炎病毒(JEV)是一种人畜共患的虫媒病毒,具有传染性和危险性,研究这类病毒需要一种安全的研究代替工具,假型病毒技术为解决这些问题提供了一种有效的研究手段。为了构建1种高包装滴度的JEV假型病毒,我们设计并包装出了3种乙脑假型病毒(JEVpv),分别是融合表达了水泡口炎病毒(VSV)囊膜蛋白强信号肽和JEV囊膜蛋白(ME)的VSVMEpv,带有乙脑自身弱信号肽及ME蛋白的SPMEpv,以及不带有信号肽的MEpv。蛋白免疫印迹结果显示,3种JEVpv均能成功表达JEV的E蛋白及HIV的p24蛋白;透射电镜观察显示,3种JEVpv的粒子直径在1 20~180nm;Realtime RT-PCR结果显示,VSVpv的包装滴度是MEpv的17倍,而SPMEpv的包装滴度是MEpv的6倍,说明信号肽能够显著增强病毒的包装滴度,同时强信号肽的增强效果高于弱信号肽;对绿色荧光蛋白及荧光素酶的表达检测显示,3种JEVpv均能感染293T及BHK-21细胞,且感染滴度没有显著差异(P>0.05),说明信号肽不影响JEVpv的感染能力。因此,我们的研究提供了一种经济高效的日本乙型脑炎假型病毒的包装方法,为乙脑的入侵机制研究奠定了基础。
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