色氨酸-2,3-加双氧酶(TD02)的异源表达及酶活测定

来源 :2012年第五届全国微生物遗传学学术研讨会 | 被引量 : 0次 | 上传用户:oi597986123
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  目的:在玫瑰孢链霉菌中克隆出dptJ基因并进行异源表达和酶活测定。方法:将dptJ基因从Streptomyces roseosporus基因组中克隆出来,然后利用PET23b载体转入BL21(DE3)中,利用IPTG诱导异源表达,然后通过蛋白纯化仪,利用镍亲和柱纯化DptJ蛋白,并利用UV进行体外酶活以及底物特异性测定。结果:成功进行了dptJ基因的克隆和异源表达,体外酶活测定实验,以L-Trp为底物得出其动力学参数Km=0.256±0.064mM,与相关文献报道的数据吻合,可以证明其具有以色氨酸为底物催化产生甲酰犬尿氨酸的活性。结论:dptJ基因确实是一种色氨酸-2,3-加双氧酶。
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