论文部分内容阅读
[目的]研究脂肪酸2-羟化酶(Fatty acid 2-hydroxylase,FA2H)在纳米二氧化硅颗粒(Silica nanoparticles,SiO2 NPs)致内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ER stress)发生的肝源HepG2细胞中的表达变化及潜在影响.[材料和方法]以肝源HepG2细胞系作为主要实验模型,分别暴露浓度梯度(0,25,50,100和200ug/ml)的SiO2 NPs和浓度梯度(0,25,50,100和200nM)的毒胡萝卜素(Thapsigargin,TG),其中TG是作为内质网应激的阳性对照.暴露24小时后,MTT法分析细胞活力,Western blot法检测内质网应激标记物CHOP、内质网应激IRE1通路相关蛋白pJNK和FA2H的蛋白表达水平,RT-PCR法检测FA2H的基因表达水平.同时,以中国仓鼠卵巢细胞系作为验证模型,选取FA2H表达极低CHO细胞(CHO-vec)和hFA2H过表达CHO细胞(CHO-hFA2H),分别暴露浓度梯度为(0,50和200ug/ml)的SiO2 NPs和浓度梯度为(0,50和200nM)的TG,24小时后分析细胞活力,并检测内质网应激标记物p-eIf2α、CHOP及FA2H的蛋白表达水平.2-羟基棕榈酸(2-OH PA)为FA2H的产物,为进一步探讨FA2H对SiO2 NPs暴露引起的内质网应激的潜在影响,先用10μM(R)-2-OH PA(2R)或10μM (S)-2-OH PA(2S)处理HepG2细胞24小时,之后再进行200ug/ml SiO2 NPs暴露24小时.检测内质网应激标记物CHOP及FA2H的蛋白表达水平.以上每组结果均重复三次实验.[结果]细胞活力实验结果表明,本实验中SiO2 NPs/TG所选取的最高浓度所引起的细胞活力衰减均小于35％,即低于IC50.在HepG2细胞中,随着SiO2 NPs/TG暴露浓度的升高,CHOP、pJNK蛋白表达水平均显著升高,差异具有统计学意义(P＜0.01)；而FA2H在蛋白及基因表达水平均下降,差异具有统计学意义(p＜0.05).在CHO细胞中,CHO-vec无FA2H表达,CHO-hFA2H大量表达FA2H；内质网应激标记物p-eIf2α和CHOP在CHO-hFA2H中的蛋白表达均低于同处理的CHO-vec,差异具有统计学意义(p＜0.05).在预先经过2-OH PA处理再进行SiO2 NPs的HepG2细胞中,CHOP的蛋白表达水平较SiO2 NPs单独暴露组有所下降,差异具有统计学意义(p＜0.05)；而FA2H的蛋白表达水平有所回升,差异具有统计学意义(p＜0.05).[结论]SiO2 NPs可能通过降低FA2H功能从而引起HepG2细胞发生内质网应激,而FA2H产物可缓解SiO2 NPs所致的应激反应,揭露了FA2H对内质网应激的潜在关系及重要影响,进而提示可通过适量摄入脂肪酸来改善纳米颗粒高危暴露人群机体损伤的可能性.