目的 研究RasGRP1 在湿疹患者外周血T 细胞中的表达。以RasGRP1 为靶点,构建含有目的基因H-RasGRP1-shRNA 的慢病毒颗粒,研究基因沉默RasGRP1 后对细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法 采用免疫磁珠分选法从外周血中分选T 细胞。使用RT-PCR 及Western Blot 方法检测湿疹患者及正常人外周血T 细胞中RasGRP1的表达。构建含有目的基因H-RasGRP1-shRNA 的慢病毒颗粒,对T 细胞进行转染,使用RT-PCR 和Western Blot 的方法检测转染后不同时间点(12h、24h、48h、72h)T 细胞内RasGRP1 的表达情况,并使用流式细胞仪检测T 细胞的凋亡。结果 使用免疫磁珠分选法分选T 细胞,其纯度能达到98％以上。在纯化后的T 细胞中,湿疹患者RasGRP1 的mRNA和蛋白质的表达水平明显高于正常人。成功构建H-RasGRP1-shRNA 的慢病毒颗粒。使用慢病毒颗粒转染T 细胞后,T 细胞内RasGRP1 的mRNA 及蛋白水平下降,随着时间的延长(12h、24h、48h、72h),RasGRP1 的表达逐渐下降,72h 时RasGRP1 的表达几乎消失。同时转染后T 细胞的凋亡加快。结论 RasGRP1 可能成为湿疹治疗中的一个作用靶点,为基因治疗及免疫治疗提供新的思路。