【摘 要】
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目的 非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethlarginine,ADMA)是导致慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)进展的独立危险因素.本研究探讨ADMA对促纤维化细胞因子——
【机 构】
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首都医科大学附属北京友谊医院肾内科,首都医科大学肾病学系
【出 处】
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中国工程院医药卫生学部肾脏病前沿论坛、第十三届华北地区暨北京市肾脏病学术年会
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目的 非对称二甲基精氨酸(asymmetric dimethlarginine,ADMA)是导致慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)进展的独立危险因素.本研究探讨ADMA对促纤维化细胞因子——转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)表达的影响,以及肌动蛋白细胞骨架在该过程中的作用.方法 体外培养人肾小球内皮细胞,设立实验组和对照组.实验组分别给予浓度为5,50,100,200 ？mol/L的ADMA与细胞共同孵育24h.或分别用细胞骨架解聚剂Cyto D(5 ？mol/L),细胞骨架稳定剂Jas(1 ？mol/L),p38 MAPK抑制剂SB203580 (10 ？mol/L),NADPH氧化酶抑制剂 apocynin (100 ？mol/L)预处理细胞30min,再给予100 ？mol/L的ADMA刺激 24h.刺激结束后,采用免疫荧光法观察细胞骨架F-actin的结构变化,采用EMSA法检测核转录因子NF-κB与DNA的结合情况,采用RT-PCR和Western Blot法检测TGF-β1的表达量.结果 ADMA呈浓度依赖性的增加人肾小球内皮细胞中应力纤维的数量、改变细胞形态,并促进NF-κB与DNA的结合,进而增加TGF-β1的表达量.利用细胞骨架解聚剂或稳定剂影响肌动蛋白骨架的动力学,或利用p38 MAPK抑制剂、NADPH氧化酶抑制剂减少应力纤维的数量,均可有效的抑制ADMA引起的NF-κB与DNA结合,以及TGF-β1表达增加的效应.结论 ADMA可通过肌动蛋白细胞骨架依赖的途径,增加人肾小球内皮细胞中NF-κB与DNA的结合,从而增加促纤维化细胞因子TGF-β1的表达.针对肌动蛋白骨架的靶向治疗,可能会成为对抗ADMA促肾脏纤维化作用的一种有效途径.
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