【摘 要】
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目的:建立以白色念珠菌Csa2蛋白抗体为靶标的双抗原夹心ELISA方法,评价该方法的检测灵敏度和特异性. 方法:构建pPIC9K-CSA2重组表达载体,电转化酵母菌GS115表达重组蛋白rC
【机 构】
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南方医科大学珠江医院检验医学部,广东,广州 510282
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目的:建立以白色念珠菌Csa2蛋白抗体为靶标的双抗原夹心ELISA方法,评价该方法的检测灵敏度和特异性.
方法:构建pPIC9K-CSA2重组表达载体,电转化酵母菌GS115表达重组蛋白rCsa2并纯化.将纯化的rCsa2蛋白分别包被96孔板,浓度为0.1μg/mL;标记辣根过氧化物酶,1∶1000稀释作为检测抗原;免疫家兔制备多克隆抗体阳性血清.检测一系列倍比稀释的兔抗阳性血清确定检测方法的灵敏度;检测新型隐球菌rCpl1兔抗血清、烟曲霉菌的rAfmp1和rAfmp4兔抗血清、马尔尼菲青霉菌的rMp1p5兔抗血清确定rCsa2兔抗是否与上述4种蛋白存在交叉反应.
结果:表达纯化的rCsa2蛋白经western blot鉴定为13.3kDa蛋白,符合预期;建立的双抗原夹心ELISA,可检测到rCsa2免疫兔血清的最高稀释倍数为1∶16000;并且不与上述4种蛋白的免疫兔血清发生交叉反应.
结论:本研究建立的双抗原夹心ELISA方法具有较高的检测灵敏度和特异性,利用重组蛋白建立双抗原夹心ELISA是一种灵敏度和特异性好、高效经济的抗体检测方法.
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