【摘 要】
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根据纳米磁珠非特异性吸附核酸的原理,我们研制开发同时提取多种类病毒或病毒核酸的高通量核酸提取方法,结合实时荧光RT-PCR技术,建立了多种植物类病毒的纳米磁珠实时荧光RT-
【机 构】
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北京出入境检验检疫局检验检疫技术中心; 武汉哇哇噻纳技术开发有限公司北京生物技术研究所;
【基金项目】
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国家公益性项目(20111035);“973”课题(2011CB932800)
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根据纳米磁珠非特异性吸附核酸的原理,我们研制开发同时提取多种类病毒或病毒核酸的高通量核酸提取方法,结合实时荧光RT-PCR技术,建立了多种植物类病毒的纳米磁珠实时荧光RT-PCR检测技术。将纳米磁珠技术应用于桃潜隐花叶类病毒的核酸提取,并与RNeasyPlant mini kit提取核酸方法进行比较。结果表明,纳米磁珠方法提取桃叶样品中的PLMVd RNA用时短,提取单个样品仅需15min;纳米磁珠方法提取的RNA纯度高,PCR抑制因子少,能够进行一般的分子生物学操作。纳米磁珠方法提取的PLMVd RNA在总RNA中所占的百分比要高于RNeasy Plant mini kit方法,更适合类病毒分子的纯化与鉴定。用纳米磁珠方法提取的PLMVdRNA的检测灵敏度比RNeasy Plant mini kit方法检测灵敏度高100倍,这说明纳米磁珠方法在痕量PLMVd RNA检测方面更具优势。
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