【摘 要】
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目的:观察CMT2L致病基因HSPB8突变(K141N)对线粒体在细胞内分布、功能的影响和二者的共定位情况。方法:构建野生型(WT)和K141N突变型(MT) HSPB8质粒,应用脂质体转染技术转
【机 构】
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浙江大学医学院附属第二医院神经内科
【出 处】
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首届中国遗传与疾病论坛——常见与罕见神经遗传病规范化诊治学术交流会
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目的:观察CMT2L致病基因HSPB8突变(K141N)对线粒体在细胞内分布、功能的影响和二者的共定位情况。方法:构建野生型(WT)和K141N突变型(MT) HSPB8质粒,应用脂质体转染技术转染SH-SY5Y细胞,48h后使用mito-tracker标记线粒体,应用激光共聚焦显微镜观察线粒体的分布及其与HSPB8共定位情况。转染48h后,用线粒体去偶联剂(CCCP)处理细胞30min,使用Rho-123染色,应用流式细胞仪通过Rho-123荧光强度的变化检测线粒体膜电位的变化。构建WT和MT-HSPB8慢病毒载体,转染SD胎鼠脊髓运动神经元,72h后标记线粒体,应用共聚焦显微镜观察线粒体的分布变化。
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