【摘 要】
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目的：构建高效表达Klotho外膜蛋白的基因工程菌,为其机制研究奠定了基础.方法：通过PCR方法,分别以pET3c-Klotho及Sumo-EGF为模板合成Klotho外膜蛋白及sumo 基因片段,构建四种原核表达载体pET22b-Klotho、pET22b-sumo-Klotho、pET3c-Klotho、pET3c-sumo-Klotho分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3) plys
【机 构】
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吉林农业大学生物反应器与药物开发教育部工程研究中心,长春130118;吉林农业大学生命科学学院,长春130118
【出 处】
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泛环渤海地区(七省二市)生物化学与分子生物学会2010年学术交流会
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目的：构建高效表达Klotho外膜蛋白的基因工程菌,为其机制研究奠定了基础.方法：通过PCR方法,分别以pET3c-Klotho及Sumo-EGF为模板合成Klotho外膜蛋白及sumo 基因片段,构建四种原核表达载体pET22b-Klotho、pET22b-sumo-Klotho、pET3c-Klotho、pET3c-sumo-Klotho分别转化原核表达宿主菌Rosetta(DE3) plysS、BL21(DE3)、BL21(DE3) Star plysS、origima(DE3)、BL21AI,筛选Klotho蛋白表达的最佳质粒与宿主菌组合.Ni离子亲和层析法纯化Klotho外膜蛋白及Western blot法鉴定Klotho外膜蛋白.结果：pET22b--sumo-Klotho质粒与Rosetta(DE3) plysS宿主菌为最佳组合表达,经IPTG诱导, SDS-PAGE电泳后表明目的蛋白大部分以可溶性形式存在,约占菌体总蛋白的30％,经Ni离子亲和层析法纯化sumo-Klotho外膜蛋白后,sumo酶酶切后,再过Ni离子亲和后,Klotho外膜蛋白纯度为95％以上,Western blot法鉴定为Klotho外膜蛋白.结论Klotho 外膜蛋白的成功制备为其机制研究奠定了基础.
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