ADC药物是一类将单克隆抗体（Antibody）与不同数目的小分子毒素（Payload）通过连接子（Linker）偶联组成的生物治疗药。ADC通过高特异性的单克隆抗体与靶细胞表面抗原结合,通过内吞作用进入细胞,通过化学和/或酶促作用释放出小分子肿瘤细胞毒性药物以达到消灭靶细胞的目的。ADC药物的生物分析通常要结合色谱和配体两种技术手段,检测内容主要包括:游离小分子、ADC及总抗体药物浓度。此外,还需考察其可能引起的免疫原性反应。游离小分子的定量检测首选液相色谱-质谱联用技术（LC-MS/MS）,其具有选择性和灵敏度高的特点。给药后体内游离小分子的浓度较低,通常在pg/mL级别,常用前处理方法有蛋白沉淀法、液液萃取、固相萃取,其中后两种方法均可以对样品进行浓缩。其次需选用灵敏度高的检测仪器,通过对质谱参数,液相参数,筛选流动相提高方法灵敏度。另一个定量分析游离小分子毒素药物的挑战在于ADC药物的稳定性,通常分析研究者除了考虑游离小分子药物本身的稳定性,还要考虑一定浓度的ADC药物母药或含linker的小分子存在下,再加入一定浓度的游离小分子药物,如不稳定表现在游离小分子的浓度随时间的增长或温度的升高而升高,这与小分子本身稳定性所导致的药物浓度下降是相反的。ADC药物的不稳定性在于连接子的裂解,可通过控制酸的比例,加入酶抑制剂或降低温度进行操作。ADC和总抗体的药物浓度分析一般采用配体结合方法。对于ADC的分析,建立的分析方法要考虑尽量不受DAR变化的影响。推荐采用抗小分子抗体作为包被试剂,抗人IgG抗体或靶抗原作为检测试剂,该方法能检测到DAR≥1的ADC,且对DAR值变化相对不敏感。但是可能需要注意低DAR值引起的低亲和力,从而导致方法灵敏度较低的情况,可以采用SA-ELISA方法提高灵敏度。对于总抗体的分析,关键点是与ADC分析的物质基础保持一致,以ADC药物的抗体部分为物质基础,如果上述ADC方法的检测试剂采用的是抗人IgG抗体,那么总抗体的包被和检测试剂均采用抗人IgG抗体;如果上述ADC方法的检测试剂采用的是靶抗原,那么总抗分析采用靶抗原作为包被试剂,抗人IgG抗体作为检测试剂。考虑到方法的特异性,一般推荐ADC的检测试剂和总抗体的包被试剂选择靶抗原。对于ADC这种多结构域的蛋白药物,在非临床,一般针对整个药物分子进行抗药抗体的初步筛选和确证试验,所以阳性质控的制备是针对整个药物分子,方法主要是桥连-ELISA。根据药物风险评估或产品特征,进行滴度、域特异性或抗体分型的评价。