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[目的]建立鸡血浆中海南霉素含量测定方法,为研究海南霉素相关制剂在鸡体内药动学奠定基础。[方法]选择ESI~+电离模式,将制备好的质谱调谐溶液通过质谱仪针泵恒流方式进样,先进行Q1扫描(Q1 Scan),确定海南霉素的母离子,然后通过产物离子扫描方式,扫描范围为m/z600-1000,确定海南霉素母离子的子离子质荷比。根据定量分析流程,确定海南霉素的母离子为m/z907.6,子离子为m/z 863.6和m/z 845.6,优化得到碰撞能(CE)值为32.0 eV,碰撞室射出电压(CXP)为12.0 V,摄入电压(EP)为10.0 V。鸡血浆中的海南霉素以液液萃取法提取,采用Ultimate UHPLC XB-C18 (1.8μm,2.1×100mm)色谱柱和等度洗脱分离待测样品中的各组分;使用三重四级杆质谱仪的多反应监测(MRM)模式进行定量分析,外标法定量。流动相A是乙腈,B是0.1%甲酸水溶液(含5 mmol/L乙酸铵),流速为0.4 mL/min,进样量为5μL。[结果]在选定的色谱条件下,海南霉素在1-500 ng/mL浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999。本方法的检测限(LOD)和定量限(LOQ)分别为0.5ng/mL和1ng/mL。高、中、低三个浓度空白血浆添加样品(1、100、500 ng/mL)的批间回收率分别为95.6±6.36%、101.6±5.78%、94.0±5.88%,日内变异系数分别为5.42-7.65%、4.94-6.22%和5.44-6.80%,日间变异系数在5.70-6.66%之间。标准储备液和待测样品中的待测物在给定条件下均具有较高的稳定性,基质效应不明显。[结论]方法学研究结果表明,本试验建立的鸡血浆中海南霉素含量HPLC-MS/MS测定方法适用于鸡血浆中海南霉素含量的测定。