【摘 要】
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根据发表的猪圆环病毒2型(PCV 2)ORF2基因序列,设计合成一对特异性引物,从分离到的PCV 2吉林株(JL 01)中扩增出PCV 2 ORF2 579bp的核苷酸片段,经BamHI和HindⅢ晦切后转入到表达栽体pET-32a,经鉴定获得阳性重组表达质粒pET-32a-ORF 2,将其转化到表达宿主菌BL21中,经IPTG诱导,成功表达了ORF2基因编码的部分结构蛋白,分子量为40Ku,表达
【机 构】
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吉林出入境检验检疫局,吉林 长春 130062 辽宁益康生物制品有限公司,111000 惠州出入境检验检疲局,516006
【出 处】
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中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第三届猪病防控学术研讨会
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根据发表的猪圆环病毒2型(PCV 2)ORF2基因序列,设计合成一对特异性引物,从分离到的PCV 2吉林株(JL 01)中扩增出PCV 2 ORF2 579bp的核苷酸片段,经BamHI和HindⅢ晦切后转入到表达栽体pET-32a,经鉴定获得阳性重组表达质粒pET-32a-ORF 2,将其转化到表达宿主菌BL21中,经IPTG诱导,成功表达了ORF2基因编码的部分结构蛋白,分子量为40Ku,表达量为20％左右,通过western-Blot检测表明,表达的重组蛋白能够被PCV2阳性血清所识别,具有良好的反应原性.
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副粘病毒可以引起一系列猪病,给养猪业带来了重大损失,同样给人类带来的严重的威胁.国内关于猪副粘病毒病的最早报告是在2000年,本实验室于2006年在发病猪体内分离出一病毒,后经分子鉴定属于副粘病毒,为禽副粘病毒Ⅰ型(APMV-1),并对其进行了生物学特性分析.
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将猪细小病毒(PPV)免疫的BALB/c小鼠脾细胞与SP2/0细胞在聚乙二醇作用下融合,用ELISA方法筛选,以有限稀释法稀释3次,得到分泌抗PPV单克隆抗体(McAb)细胞株15株,并对其进行较详细的染色体计数、抗体亚类、ELISA交叉实验、Western blotting等生物学特性鉴定.染色体计数发现其核内染色体数均符合杂交瘤细胞染色体数,抗体属性为IgG1,交又实验等特异性分析发现该单抗只
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