【摘 要】
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对堆肥和土壤样品进行热选择性培养,通过巢式PCR 从混合微生物样品的基因组DNA中获得嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因(CAT)。将该基因克隆到表达载体pET-28a(+)上,并转化大肠
【机 构】
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北京科技大学环境工程系,北京 100083 北京科技大学生物科学与技术系,北京 100083
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对堆肥和土壤样品进行热选择性培养,通过巢式PCR 从混合微生物样品的基因组DNA中获得嗜热脂肪芽孢杆菌过氧化氢酶基因(CAT)。将该基因克隆到表达载体pET-28a(+)上,并转化大肠杆菌E. coli BL21(DE3),从而构建得到重组菌E. coli BL21(DE3)/pET)-CAT。SDS-PAGE检测显示83KD 处有明显的条带,结合酶活分析确定CAT在重组大肠杆菌中得到高效表达。重组菌破碎得到的粗酶液进行金属亲和纯化后,比酶活为484.56 U/mg蛋白。对纯化酶进行酶学性质研究发现,该酶的最适催化温度为60℃-70℃,30℃-70℃时热稳定性良好；pH6.0时酶活最高,在pH5.0-9.0范围内酶稳定性好；催化底物(h2O2)最适浓度为50mmol/L,Km值为22.62mmol/L。
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