目的 通过ELISA法、荧光定量PCR法、流式细胞术观察致敏诱导期小鼠血清生化指标、脾脏中致敏基因以及引流淋巴结淋巴细胞中细胞表面分子的变化情况,探讨在致敏诱导期检测致敏性的机制.方法 建立LLNA：BrdU-ELISA方法：根据指导原则,(选择动物类型),选择丁子香酚与α-已基肉桂醛作为阳性致敏物,建立试验方法,并通过致敏性质已知的化学品验证试验证明该方法的稳定性和可重复性.验证试验分别选择2,4-二硝基氯苯、2-巯基苯并噻唑、戊二醛作为致敏阳性物,甘油、氯化钾、乙醇作为致敏阴性物.采用ELISA法检测测试动物血清中组胺、IL-2,IL-4的水平.应用荧光定量PCR方法,检测测试动物脾脏致敏相关基因T-bet,CTLA4和foxp3的差异表达,应用流式细胞术,检测小鼠淋巴细胞悬液中的淋巴细胞亚群以及与致敏相关的细胞表面分子变化情况.结果 成功建立了LLNA： BrdU-ELISA法,该方法重复性良好,可以稳定、快速、敏感的检测化学品致敏性.ELISA法检测小鼠的血液生化指标结果显示,各致敏阳性组小鼠血清中的His和IL-4水平均增加,IL-2无明显变化,其中IL-4水平显著变化.小鼠脾脏中三种致敏相关基因的差异表达研究结果显示,致敏阳性组小鼠脾中T-bet基因表达量升高,其中丁子香酚组、α-己基肉桂醛组、DNCB组的增加量与溶剂对照组相比差异性显著.但其他两种基因的表达量无明显变化.小鼠淋巴结中CD4阳性T细胞数量比例与溶剂对照组相比显著增多.CD28的表达量均增多,其中戊二醛组与2-巯基苯并噻唑组与溶剂对照组相比差异性显著.结论 成功在本实验室建立LLNA： BrdU-ELISA方法,可以选用ELISA试剂盒检测血清中IL-4水平为辅助指标.小鼠脾中T-bet基因表达量升高、小鼠淋巴结淋巴中T细胞数量与CD4阳性T细胞数量比例增多,表明皮肤过敏反应是由T细胞介导的迟发型变态反应.