【摘 要】
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目前,按照我国《兽药典》规定,猪瘟活疫苗效力检验有两种方法,一种是通过兔子对猪瘟兔化弱毒感染后体温升高的特性,利用替代动物兔检测猪瘟疫苗的兔体感染量( RID)来判定猪瘟活疫苗的效力;另一种方法就是用猪瘟疫苗免疫猪,然后对其攻击强毒,通过疫苗免疫猪的存活来判断猪瘟疫苗的免疫效力.前者是目前猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法,但是该方法受试验兔品种、个体差异和饲养环境的影响很大,加之每批疫苗效力检验兔子
【机 构】
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中国兽医药品监察所,北京 100081 广东永顺生物制药有限公司,广州 511356
【出 处】
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第五届中国兽药大会(中国畜牧兽医学会动物药品学分会2014年学术年会、中国畜牧兽医学会生物制药学分会暨中国微生物学会兽医
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目前,按照我国《兽药典》规定,猪瘟活疫苗效力检验有两种方法,一种是通过兔子对猪瘟兔化弱毒感染后体温升高的特性,利用替代动物兔检测猪瘟疫苗的兔体感染量( RID)来判定猪瘟活疫苗的效力;另一种方法就是用猪瘟疫苗免疫猪,然后对其攻击强毒,通过疫苗免疫猪的存活来判断猪瘟疫苗的免疫效力.前者是目前猪瘟活疫苗效力检验最常用的方法,但是该方法受试验兔品种、个体差异和饲养环境的影响很大,加之每批疫苗效力检验兔子仅只有两只,因而常出现一批疫苗用这两只兔子检验不合格,用那两只检验就合格;在这里检验不合格,换个地方检验合格的怪现象.而后者用猪效检,由于猪瘟强毒攻击存在散毒导致生物安全的问题,已很少在猪瘟疫苗检验中使用.为了探索一种不依赖动物的猪瘟疫苗效力检验新方法,本研究将待检猪瘟疫苗系列稀释后分别接种易感ST传代细胞,使病毒在细胞中增殖到足够量以后,再用特异的抗原捕获ELISA方法检测猪瘟疫苗的各稀释度病毒感染细胞后增殖的子代病毒,反过来计算疫苗中病毒的最高细胞感染剂量,从而建立了猪瘟疫苗病毒的细胞感染量(TCID)的效力检验动物替代方法.试验证明:疫苗中活病毒粒子越多,TCID就越高;对不同类型猪瘟疫苗的检测结果表明,该方法更适用于细胞源猪瘟活疫苗的效力效检.使用TCID和RID两种检测方法同时对12批猪睾丸传代细胞源(STC)和3批牛睾丸原代细胞源(CTC)猪瘟活疫苗进行了比对效检,结果表明,用TCID测定方法检验,12批STC猪瘟活疫苗每头份均含4xlOs TCID,3批CTC猪瘟活疫苗每头份均低于4x104 TCID;用兔子感染体温测定法,12批STC猪瘟活疫苗每头份含量在2.6-3.Ox104 RID之间,3批CTC猪瘟活疫苗每头份含7.0-8.Ox103 RIDo试验证明:本实验室建立的TCID检测结果与现有质量标准RID的结果存在良好的相关性,使用抗原捕获ELISA 检测猪瘟病毒特异性好,对各稀释度中猪瘟病毒用ST细胞再次扩增,大大提高了高稀释度中微量、不易被ELISA检测到的猪瘟病毒含量,有效解决了ELISA检测猪瘟疫苗时对微量病毒检测敏感性欠佳的问题.使用抗原捕获ELISA检测猪瘟活疫苗的TCID含量,经过对15批疫苗检测结果进行比较分析证明,该方法重复性好,检测结果稳定可靠,由于该方法使用统一的试剂盒,结果数据为机器判读,软件分析,既有效解决了猪瘟病毒感染不出现细胞病变而无法用肉眼判定TCID的难点,又解决了用荧光抗体方法检测结果判定时人为主观因素的影响及RT-PCR方法检测时不能区分死的和活的猪瘟病毒的困扰.试验证明:用抗原捕获ELISA方法检测猪瘟疫苗中的活病毒TCID含量,有效解决了兔子个体、品种、环境等因素对检测结果的影响,是猪瘟疫苗效力检验的一种特异敏感的动物替代方法.
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