【摘 要】
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目的：阪崎肠杆菌作为一种致病菌,主要通过污染婴幼儿配方食品导致婴儿患脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症等疾病.本实验采用16SrDNA分型技术对乳制品和其加工环境中分离的阪崎肠杆菌进行分型研究,对其引起的食源性疾病溯源的研究具有重要意义.方法：以市售的奶粉和环境中分离的13株阪崎肠杆菌作为试验菌株.首先对菌悬液提取基因组DNA,方法采用手提和试剂盒提取,对这两种方法进行比较,然后对目的基因16SrR
【机 构】
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东北农业大学食品学院 哈尔滨 150030 东北农业大学国家乳业工程技术研究中心 哈尔滨 1500
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目的：阪崎肠杆菌作为一种致病菌,主要通过污染婴幼儿配方食品导致婴儿患脑膜炎、坏死性小肠结肠炎和菌血症等疾病.本实验采用16SrDNA分型技术对乳制品和其加工环境中分离的阪崎肠杆菌进行分型研究,对其引起的食源性疾病溯源的研究具有重要意义.方法：以市售的奶粉和环境中分离的13株阪崎肠杆菌作为试验菌株.首先对菌悬液提取基因组DNA,方法采用手提和试剂盒提取,对这两种方法进行比较,然后对目的基因16SrRNA设计引物进行PCR扩增,通过对引物浓度和退火温度等条件优化,得出最佳反应条件.最后将扩增产物纯化测序,所得序列进行BLAST比对分析,建立系统发育树.结果：手提和试剂盒提取的DNA经PCR扩增后效果基本一致,但手提法较试剂盒提取节省时间,故采取手提法提取DNA.PCR的最佳反应条件为变性温度95℃,30S,退火温度58℃,30S,延伸温度72cc,1min.结论：16SrDNA对菌株分型的结果准确,分辨率较高,对食源性疾病溯源的研究具有重要意义.
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