【摘 要】
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[目的]评价硫酸化川明参多糖(sCVPS)体内外抗新城疫病毒(NDV)活性.[方法]在体外仓鼠肾细胞系(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(CEF)上,通过蚀斑减少法测定sCVPS对NDV的半数抑制浓度(IC50)和作用方式,以荧光定量PCR检测在大量病毒感染下sCVPS的抗NDV活性,以免疫荧光法观察病毒在细胞内的表达情况.通过滴鼻、点眼方式造成SPF雏鸡人工感染NDV的模型,肌肉注射给予不同剂量的
【机 构】
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四川农业大学动物医学院天然药物研究中心,四川成都611130
【出 处】
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中国畜牧兽医学会兽医药理毒理学分会第十一届会员代表大会暨第十三次学术讨论会与中国毒理学会兽医毒理专业委员会第五次学术研讨
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[目的]评价硫酸化川明参多糖(sCVPS)体内外抗新城疫病毒(NDV)活性.[方法]在体外仓鼠肾细胞系(BHK-21)和鸡胚成纤维细胞(CEF)上,通过蚀斑减少法测定sCVPS对NDV的半数抑制浓度(IC50)和作用方式,以荧光定量PCR检测在大量病毒感染下sCVPS的抗NDV活性,以免疫荧光法观察病毒在细胞内的表达情况.通过滴鼻、点眼方式造成SPF雏鸡人工感染NDV的模型,肌肉注射给予不同剂量的sCVPS,通过测定存活率、不同组织中的病毒毒力、口腔和泄殖腔分泌物中病毒毒力、雏鸡免疫水平和组织病变评价其体内抗NDV的活性.[结果]体外实验结果显示,sCVPS在BHK-21和CEF上对NDV的IC50分别为62.55-76.31 μg/mL和101.57-125.90 μg/mL,而阳性对照硫酸肝素的IC50分别为99.28和118.79 μg/mL.不同加药时间实验表明,sCVPS抗NDV活性在于抑制病毒感染细胞的早期阶段；通过对其作用方式研究表明,sCVPS在BHK-21上能抑制病毒的吸附过程,而在CEF上能抑制病毒的吸附和穿入过程.荧光定量PCR结果表明,在病毒感染复数(MOI)为1时,sCVPS能显著抑制病毒对细胞的感染.免疫荧光实验结果表明,在病毒感染量为0.1 MOI时,sCVPS能降低细胞中病毒蛋白的表达量.体外实验结果显示,给予雏鸡8 mg/kg的sCVPS,可提高雏鸡感染NDV后的存活率20％；在CEF上检测不同组织中病毒毒力的实验结果表明：sCVPS能降低脑、肺脏、脾脏、胸腺、雏鸡口腔分泌物以及泄殖腔中的病毒滴度,此结果表明sCVPS可以降低带毒雏鸡传播病毒的能力.通过ELISA试剂盒检测表明sCVPS能提高雏鸡血清中干扰素α和γ的水平,表明其抗NDV机制之一是通过提高机体免疫力而起到抗病毒活性.病理组织学研究结果表明,sCVPS可以减轻NDV感染后的组织病变.[结论]sCVPS在体内外均具有显著的抗新城疫病毒活性.在体外,能抑制病毒早期吸附和穿入过程,并能抑制大量病毒的感染；在体内,能提高病毒感染雏鸡的存活率并降低组织和分泌物中的病毒量,以及雏鸡的免疫力,并减轻NDV感染所引起的组织病变.
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