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目的:探讨门冬氨酸钾对Ouabain(或H2O2)致人多巴胺能神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤的保护及抗凋亡作用的研究.
方法:培养SH-SY5Y细胞,建立Ouabain致SH-SY5Y细胞损伤模型,和H2O2致SH-SY5Y细胞氧化模型.实验分为正常对照组、Ouabain(或H2O2)组、KCl 组、MK801组、K-asp(15mM,25mM,50mM,75mM)组,各药物与Ouabain(或H2O2)共孵育的时间分为6、24、48小时3个时间点.应用MTT比色法检测细胞存活率,Nissl染色观察细胞尼氏小体的变化,DAPI染色观察细胞核形态变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,电镜观察细胞器的变化。
结果:MTT比色法显示100μM的Ouabain降低了SH-SY5Y细胞的存活率,作用24小时25mMKC1和25mMK-asp的保护作用显著,作用48小时15mM和25mMK-asp的细胞存活率高于25mMKCI; DAPI染色结果显示随着作用时间的增加,Ouabain使SH-SYSY细胞的凋亡率逐渐升高,25mMK-asp表现出保护作用;Nissl染色结果表明Ouabain组的染色淡染,25mMK-asp组染色加深,改善了细胞尼氏小体的活性;在透射光下观察到在24和48小时Ouabain组的细胞体积变小,25mMK-asp能够抑制细胞体积变小;Annexin-VFITC/PI双染流式细胞术结果表明:随着时间的增加,H202使SH-SY5Y细胞的凋亡率升高,25mMK-asp组凋亡率显著降低:电镜下,Ouabain组的细胞器破坏严重,细胞核碎裂,25mMK-asp明显改善细胞器的形态。
结论:门冬氨酸钾对Ouabain诱导的SH-SY5Y损伤有保护作用,同时对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞凋亡具有显著的抑制作用。