【摘 要】
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目的:在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体.方法:筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High AffinityGST-NTA resin和High Affinit
【机 构】
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南京军区军事医学研究所,南京210002;南京医科大学基础医学院,南京210029 南京军区军事医
【出 处】
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2015中国生物制品年会暨第十五次全国生物制品学术研讨会
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目的:在原核细胞中表达埃可病毒6型的表面蛋白VP1,制备其多克隆抗体.
方法:筛选VP1抗原表位富集区,优化基因序列,分别克隆至质粒pGEX-4T-2和pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1,分别转化大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,分别用High AffinityGST-NTA resin和High Affinity Ni-NTA resin进行纯化.以纯化后的VP1-His融合蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,以VP1-GST融合蛋白为检测抗原,采用间接ELISA法检测血清效价,Western blot法检测特异性.
结果:经双酶切及测序鉴定,证明质粒pGEX-4T-2-vp1和pET-28a-vp1构建正确;在相对分子质量约39000和20000处,分别可见VP1-GST和VP1-His融合蛋白的表达,表达量分别约占菌体总蛋白的25％和30％,发现VP1-GST为可溶性蛋白,而VP1-His主要以包涵体的形式存在,需对VP1-His蛋白进行透析复性,纯度均在90％以上;免疫新西兰大白兔后获得高效价的特异性兔抗血清.
结论:两种标签的融合蛋白均具有良好的免疫原性和抗原性,所制备的多克隆抗体具有较好的特异性,为埃可病毒检测方法的建立奠定了基础.
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