【摘 要】
：
目的:探索建立稳定可靠的单细胞逆转录PCR实验体系.方法:以SV40病毒转染的永生化人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)为实验对象,制备单细胞悬液后,在倒置显微镜下用微吸管吸取单个
【机 构】
：
第二军医大学海军医学系放射医学教研室,上海,200433
【出 处】
：
第八届全国辐射与环境生物物理学术交流会
论文部分内容阅读
目的:探索建立稳定可靠的单细胞逆转录PCR实验体系.方法:以SV40病毒转染的永生化人支气管上皮细胞株(BEAS-2B)为实验对象,制备单细胞悬液后,在倒置显微镜下用微吸管吸取单个细胞,加入到预先加好细胞裂解液的0.2ml薄壁PCR反应管中进行逆转录PCR.以人β-actin和DPH2L基因为靶基因,引物特异性扩增单个细胞中目的基因,用含有OligodT24的Poly(A)PCR引物序列非依赖性扩增单个细胞中的全部mRNA,通过各个环节上实验条件的比较优化,对这两种单细胞逆转录PCR方法的扩增效果进行了深入的研究,并通过琼脂糖凝胶电泳和DNA测序技术,分析了该方法的灵敏性、特异性、重复性和忠实性.结果:优化确定了各个环节的实验条件,建立了稳定可靠的单细胞RT-PCR实验体系;引物特异性扩增分别从单个细胞中有效扩增得到了β-actin和DPH2L的特异性产物,并无其他非特异性条带,扩增成功率可达90﹪,扩增产物的DNA测序结果经与GeneBank数据库进行比对分析为100﹪吻合;SC-Poly(A)PCR亦从单个细胞中序列非依赖性的有效扩增了全部mRNA,扩增成功率为75﹪,扩增产量可达μg水平,足够其他常规研究所用;各组对照显示整个实验过程没有受到外源性DNA污染,同时基因组DNA在该程序中也不能被扩增.结论:证实单细胞RT-PCR具有很好的灵敏性、特异性、重复性和忠实性,建立了稳定可靠的单细胞逆转录PCR实验体系,为单细胞水平上基因表达研究提供了强有力的工具.
其他文献
本文综述了近年来关于拟除虫菊酯类农药的免疫检测方法的建立,并着重讨论了作为建立免疫分析方法的关键点:拟除虫菊酯类农药的半抗原设计原则与方法.对于今后的拟除虫菊酯类
一九八一年十月十日,米匹大箐国有林的新任护林员柏光富,上任第一天就背上干粮,钻进二千五百多亩的大箐进行勘查。大箐里斧声四起,木荷、华木、黄心楠、三角枫等被砍倒的一
本文对三唑类农药的残留分析方法进行了综述,提取净化方法主要有柱层析、固相萃取、固相微萃取、液-液分配;分离检测方法有GC、LC、GC-MS和LC-MS.目前三唑类农药在动物组织中
基质固相分散(MSPD)是一项可以直接处理固体、半固体或者黏性液体样本的提取净化技术,提取、净化一步完成,简单、快速,耗费溶剂量和样本量少,在现代的农药残留分析中应用越来
恶性转化是复杂的、渐变的过程,涉及许多遗传改变,包括抑癌基因失活,癌基因激活和其他调节基因功能改变.fhit(fragilehistidinetriad)基因是一个新发现的抑癌基因,过去近10年
本文分析了我国纺织工业的发展空间，并指出应走新型工业化道路,切实转向质量和效益型的增长模式，最后阐述了自主创新的重要性。
为了筛选溶磷菌组合,研究多菌剂联合对辣椒生长的影响.通过菌株形态特征、生理生化和16S rRNA序列分析鉴定实验室保存的5株溶磷菌(HSYQ18、SYC3、WS54、FWG2、SCPG-7),筛选溶
目的：探讨铜绿假单胞菌的黏附性和生物被膜的形成能力与基因型的相关性.方法：采用改良的微量平板法对临床分离的48株PA生物被膜的形成进行定量分析;通过ERIC-PCR技术绘制48株PA
瑞士乌斯特公司(现名USTER TECHNOL0GIES AG)从世界各地采集棉、毛纱的试样，使用该公司制造的仪器进行测试，并将测试的数据分成5档水平，整理成统计图。自1957年起定名为乌斯特统
目的:以葛根为原料,采用大孔树脂法分离纯化葛根多糖,研究其抗氧化性质.方法:通过对葛根多糖吸附及解吸筛选出最优树脂,分析吸附解吸时间、样液浓度、样液pH以及乙醇的体积分